毛細管電泳檢測尿蛋白及泌尿系細菌方法研究.pdf

1、目的：近年來，毛細管電泳(CE)因其理論結(jié)構(gòu)成熟，且檢測成本低、操作簡便、耗時短等獨特的優(yōu)點而廣泛的應用到多種疾病的研究中。其中，以毛細管區(qū)帶電泳(CZE)作為分離模式的分析方法最為常見。隨著質(zhì)譜技術的不斷發(fā)展和普及，使用毛細管電泳與質(zhì)譜聯(lián)用技術(CE-MS)成為了各大課題研究的焦點。然而，質(zhì)譜分析過程繁瑣，實驗成本高昂等問題對研究成果的轉(zhuǎn)化構(gòu)成了很大的障礙，難以在實際檢測中應用。本實驗使用毛細管電泳與二極管陣列檢測聯(lián)用技術(CE-DA

2、D)建立半定量手段的尿液蛋白差異化檢測方法和細菌鑒定方法，優(yōu)化膀胱癌患者尿液特異性蛋白的檢測條件，初步探索泌尿系感染常見致病菌類型的快速鑒定手段。
　　方法：對5例膀胱癌患者及5例健康志愿者尿液蛋白中的低豐度蛋白進行含量的差異檢測，分別對檢測波長，分離環(huán)境的pH值進行了選擇和優(yōu)化，并使用電解質(zhì)添加劑對原緩沖體系進行了優(yōu)化，對電滲流進行有效控制，穩(wěn)定了分離過程中毛細管兩端的電流，提高檢測的重復性，同時也提高了低豐度蛋白的分離效率；選

3、取6種泌尿系感染常見致病菌的標準菌株進行培養(yǎng)，并以臨床中確診的臨界濃度取樣，模擬患者樣品中的濃度進行毛細管電泳的分離分析實驗，優(yōu)化分離條件，提高各細菌菌株的分離度。
　　結(jié)果：確立了使用毛細管電泳與二極管陣列檢測聯(lián)用技術對正常人組與非肌層浸潤性膀胱癌患組尿液蛋白的差異檢測最佳條件。結(jié)果顯示，共有6個蛋白峰在兩組電泳圖譜中共同存在，經(jīng)過t檢驗，其中4個蛋白峰顯示兩組間差異具有統(tǒng)計學意義，余下2個差異不明顯；另外，還有6個蛋白峰為膀胱

4、癌患者特異蛋白峰，只存在于實驗組的電泳圖譜中；經(jīng)ELISA法平行試驗，顯示兩組低豐度蛋白存在差異相關性；建立了使用毛細管電泳與二極管陣列檢測聯(lián)用技術對鑒定泌尿系感染常見致病菌的檢測方法，經(jīng)過重復性實驗考察，各菌株的遷移時間在多次測量后已基本確定，可用于在同樣實驗條件下鑒定菌株種類，同時本實驗對雙菌種感染的分離條件和檢測情況進行了探索和研究，提出了在電滲流驅(qū)動的同時使用氣壓壓力輔助推進可以有效分離兩個相近易感染菌株。
　　結(jié)論：毛細