復方中草藥對吉富羅非魚免疫相關基因表達的影響.pdf

1、本試驗以健康的吉富羅非魚為試驗動物,研究在羅非魚基礎飼料中添加不同劑量的復方中草藥對其免疫相關基因表達量的影響,確定復方中草藥的添加劑量,以初步探討復方中草藥對吉富羅非魚的作用機理。
　　 選用健康、規(guī)格整齊的吉富羅非魚(體重19.62±0.06 g)隨機分為5組,按科學的飼養(yǎng)方法進行飼養(yǎng)管理。對照組投喂基礎飼料,0.5組、1.0組、1.5組和2.0組為試驗組分別投喂添加0.5％,1％,1.5％和2％復方中草藥的飼料,復方中草藥

2、是由黃芪、當歸、甘草和山植等6種中草藥按一定比例配比制備成。養(yǎng)殖試驗共進行28天。在投喂后的第7天、第14天、第21天和第28天,分別提取試驗組和對照組的肝臟、鰓、胸腺、頭腎和脾臟5種組織中的總RNA并反轉錄成cDNA,利用Real-timePCR方法對不同組織中腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素1(IL-1β)和熱應激蛋白70基因(Hsp70)等3種免疫相關基因的表達進行定量分析。養(yǎng)殖實驗結束,用1×108cfu/mL嗜水氣單胞菌攻毒

3、,測定復方中草藥對羅非魚抗病力的影響。
　　 結果表明:添加一定劑量的復方中草藥能誘導吉富羅非魚Hsp70、TNF-α和IL-1β基因在頭腎、肝臟、胸腺、鰓和脾臟5種組織中表達。在第7天,1.5劑量組和2.0劑量組在脾臟、頭腎、鰓和胸腺組織中IL-1β基因表達量顯著高于同期對照組(P<0.05)。在第14天,1.0劑量組在鰓中IL-1β基因的表達量顯著高于同期對照組(P<0.05)并達到峰值。在第28天,0.5劑量組在脾臟和鰓中

4、IL-1β基因表達量達到最大量顯著高于同期對照組(P<0.05)。在頭腎組織中,各個劑量組吉富羅非魚IL-1β基因表達量顯著高于同期對照組(P<0.05)。
　　 在第7天時,2.0劑量組在頭腎、脾臟和胸腺組織中TNF-α基因表達量顯著高于同期對照組(P<0.05)。在第28天時,0.5劑量組在脾臟、肝臟、胸腺和頭腎組織中TNF-α基因表達量顯著高于同期對照組(P<0.05)。在整個試驗階段,1.0劑量組在在脾臟中TNF-α基因

5、表達量均顯著高于同期對照組(P<0.05),并在第14天時TNF-α基因表達量達到峰值。在整個試驗期間,1.5劑量組在胸腺、脾臟和頭腎中TNF-α基因表達量均顯著高于同期對照組(P<0.05)。
　　 在投喂第7天后,1.5劑量組和2.0劑量組在胸腺、鰓、頭腎和脾臟中Hsp70基因表達量顯著性高于同期對照組(P<0.05)。在第28天,0.5劑量組在脾臟、胸腺、肝臟、鰓和頭腎組織中Hsp70基因表達量均顯著高于同期對照組(P<0

6、.05)。在第28天,1.0劑量組在胸腺中Hsp70基因表達量達到最大量顯著高于同期對照組(P<0.05)。1.0劑量組在整個實驗的各個階段肝臟組織中Hsp70基因表達量與同期對照組無顯著性差異(P>0.05)；相對免疫保護率以2.0劑量組(61.6％)最高,次之是1.5劑量組的(53.8％)。
　　 本復方中草藥可以提高吉富羅非魚肝臟、鰓、胸腺、頭腎和脾臟5種組織中腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素1(IL-1β)和熱應激蛋白