利用酵母雙雜交篩選隨機多肽文庫的方法研究AP3D1蛋白Ear結(jié)構(gòu)域的結(jié)合特性.pdf

1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterCharacterizingthebindingpropertiesofAP3D1EardomainusingYeastTwo—hybridscreeningofarandompeptidelibraryBvChengqianZhang√一一一Supervisor：ProfJintaoZhangAssociateProfEl

2、iSongBiologicalEngineering一一一BiologicalEngineeringDepartmentMay2013摘要摘要細胞內(nèi)的膜轉(zhuǎn)運系統(tǒng)牽涉到多個層次的調(diào)控過程，包括貨物分選、膜泡形成、膜泡運輸及融合等。銜接蛋白Adaptin(AP)復合物是膜轉(zhuǎn)運系統(tǒng)中的一種關(guān)鍵調(diào)控因子，可以識別目標蛋白并把其分選到運輸膜泡內(nèi)作為貨物進行輸送?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)五種銜接蛋白復合物(APlAP5)，其中AP3(adaptorproteinc

3、omplex3)主要參與從高爾基體／內(nèi)體到溶酶體的轉(zhuǎn)運工作。AP3由四個蛋白亞基組成，其中AP3D1的C末端含有一個非常保守的Ear結(jié)構(gòu)域，它可以識別結(jié)合多種輔助蛋白形成運輸膜泡，但目前該結(jié)構(gòu)域的分子識別機制及由其所介導的生物學調(diào)控功能還不清楚。蛋白質(zhì)是生命現(xiàn)象的物質(zhì)基礎(chǔ)，而蛋白蛋白之間的相互作用在生命活動中發(fā)揮著極其重要的作用，因此對它的研究可以了解蛋白質(zhì)在生物體中的作用方式，從而揭示它在生物體內(nèi)行使的功能。為了能夠只通過一次篩選就可

4、以找出Ear結(jié)構(gòu)域的所有配體蛋白，在本論文中，我們利用酵母雙雜交技術(shù)篩選隨機多肽文庫的方法，首先找出Ear結(jié)構(gòu)域的結(jié)合多肽，然后通過生物信息學分析找出其結(jié)合規(guī)律并在蛋白質(zhì)組水平上預測其所有的潛在結(jié)合蛋白，最后再通過實驗驗證新的配體蛋白。在眾多的研究方法中，酵母雙雜交系統(tǒng)不僅可以研究活細胞體內(nèi)的蛋白質(zhì)相互作用、靈敏度高，而且不需對目的蛋白進行純化，使實驗操作簡單易行，因此是研究蛋白質(zhì)相互作用的一種強有力的方法。另外，我們篩選隨機多肽文庫，