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文檔簡介
1、本文從20個(gè)深海沉積物樣品中選擇性地分離獲得放線菌400余株,涵蓋了放線菌亞綱7個(gè)亞目中的14個(gè)科,共16個(gè)屬,并首次發(fā)現(xiàn)可從深海沉積物中分離到Tsukamurella屬和Isoptericola屬的菌株。這些菌株可分為35個(gè)OTUs,其中包含有4個(gè)潛在新種;對這些菌株的生長鹽依賴特性的測定發(fā)現(xiàn)其中6株可能是海洋專屬性的放線菌;抑菌活性測定及其抗生素合成基因調(diào)查結(jié)果則暗示了所獲的這批深海放線菌菌株具有潛在產(chǎn)生新海洋天然活性產(chǎn)物的能力。<
2、br> 本文從東太平洋ES0303站點(diǎn)深海沉積物宏基因組文庫中篩選獲得了幾類典型抗生素生物合成基因簇的相似序列。其中黏粒20G5攜帶有31kb連續(xù)的PKS/NRPS基因,通過染色體步移法將第4個(gè)ORF的NRPS基因補(bǔ)充完整,原來長為31kb的20G5外源插入片段被延長至37kb。RT-PCR結(jié)果暗示該基因簇上游含有一個(gè)在三種宿主中均存在轉(zhuǎn)錄活性的天然啟動(dòng)子序列。其PKS基因簇與海綿共生細(xì)菌中負(fù)責(zé)onnamides生物合成的PKS基
3、因的蛋白序列相似性達(dá)50%左右,其NRPS基因簇與Myxococcus xanthus腸桿菌素NRPS基因的蛋白序列相似性達(dá)到41%,暗示此基因簇可能是新穎的抗生素生物合成基因簇。
嘗試把該P(yáng)KS/NRPS基因簇在鏈霉菌中進(jìn)行了異源表達(dá):1)該黏粒中的單加氧酶基因在大腸桿菌中進(jìn)行了超量表達(dá),得到了66kD的可溶性融合蛋白;2)構(gòu)建了可用于抗生素生物合成基因簇異源表達(dá)的新鏈霉菌宿主;3)對該黏粒進(jìn)行了改造后導(dǎo)入鏈霉菌宿主,并
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