雷公藤植物遺傳關(guān)系與遺傳多樣性分析.pdf

1、中藥雷公藤系衛(wèi)矛科(Celastraceae)雷公藤(TripterygiumwilfordiiHook.f.)干燥根，在我國(guó)民間用于殺蟲(chóng)和治療皮膚病，具有抗炎、抗菌、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤及抗生育等多種作用，近些年來(lái)已成為國(guó)內(nèi)首選的免疫抑制劑之一。其同屬植物昆明山海棠(T.hypoglaucum(Lév1.)Hutch)、東北雷公藤(T.regeliiSpragueetTakeda)的干燥的根中亦含有與之相同和類似的成分，具有相近的功效。其

2、中，昆明山海棠的干燥根作為雷公藤藥材商品的主流而被大量使用。 本論文首先對(duì)雷公藤的三種原植物進(jìn)行廣泛的資源調(diào)查和樣本采集，發(fā)現(xiàn)了一類形態(tài)上居于雷公藤和昆明山海棠的中間類型，為闡明這些類型間的遺傳關(guān)系，并對(duì)其遺傳多樣性進(jìn)行評(píng)價(jià)。本文對(duì)采集到的24個(gè)居群進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析和RAPD分子指紋標(biāo)記研究，獲得以下結(jié)果： 1.形態(tài)學(xué)分析：從種質(zhì)資源圃中選擇生長(zhǎng)良好且有代表性21株雷公藤、昆明山海棠和中間類型，系統(tǒng)地研究花序總長(zhǎng)、花直徑大

3、小、小花序梗長(zhǎng)、花瓣大小，生長(zhǎng)旺盛枝和正常一般枝條葉片長(zhǎng)度、葉片寬度、葉柄長(zhǎng)度、葉脈對(duì)數(shù)等與物種分類相關(guān)的形態(tài)數(shù)量性狀指標(biāo)，每個(gè)因子實(shí)測(cè)15個(gè)數(shù)據(jù)。發(fā)現(xiàn)每個(gè)指標(biāo)在不同樣本間差異均明顯(P＜0.01)，但這些差異是連續(xù)的。葉背白粉的多少有無(wú)則與種源所在生境海拔有一定相關(guān)性，海拔越高，葉背白粉越多。又進(jìn)一步將這些指標(biāo)與枝條分支數(shù)、最長(zhǎng)枝長(zhǎng)、最長(zhǎng)枝粗等性狀一起進(jìn)行聚類分析，發(fā)現(xiàn)不能將來(lái)自不同類型的個(gè)體有效分開(kāi)。 2.遺傳關(guān)系分析：從1

4、00個(gè)隨機(jī)引物中篩選出10個(gè)引物，對(duì)24個(gè)居群110個(gè)個(gè)體進(jìn)行PCR擴(kuò)增，共得到128條帶，其中多樣性條帶123個(gè)，占96％。通過(guò)聚類分析可以看出整個(gè)群體分為3個(gè)部分，1個(gè)東北雷公藤居群明顯地與其它居群分開(kāi)；4個(gè)昆明山海棠居群聚在一起；其余19個(gè)居群則形成一個(gè)以浙江產(chǎn)典型雷公藤為核心的復(fù)合居群，而中間類型又與雷公藤有一定的遺傳分化，大量的中間類型的存在，連接了昆明山海棠與雷公藤這兩個(gè)種， 3.分類學(xué)處理：結(jié)合形態(tài)學(xué)和遺傳標(biāo)記分析

5、，建議將昆明山海棠與雷公藤兩個(gè)種合并稱為雷公藤(TripterygiumwilfordiiHook.f.)，但不同類型生長(zhǎng)發(fā)育特性上存在差異，便于品種選育，依據(jù)形態(tài)變異范圍和地理分布在雷公藤種下設(shè)立雷公藤(T.formwilfordii)、中間型雷公藤(T.form.mediaSi.etGuo.form.nov.)和昆明山海棠(T.form.hypoglaucumSi.etGuo.form.nov.)三個(gè)變型。。 3.遺傳多樣性

6、：依據(jù)RAPD分子標(biāo)記結(jié)果，計(jì)算得到所有樣本中，Nei's基因多樣性指數(shù)H=1.9606，Shannon's多態(tài)性指數(shù)I=1.4886；除去東北雷公藤1個(gè)居群，Nei's基因多樣性指數(shù)H=1.9297,Shannon's多態(tài)性指數(shù)I=0.4492。在所有典型昆明山海棠居群中，多態(tài)位點(diǎn)百分率在24.22％～35.94％之間，其中江西遂川居群多態(tài)性位點(diǎn)最高。在所有典型雷公藤居群中，多態(tài)位點(diǎn)百分率在3.91％～19.53％之間，其中湖北通城居

7、群多態(tài)性為點(diǎn)最高。在所有中間類型居群中，多態(tài)位點(diǎn)百分率在8.59％～26.69％之間，其中黃山居群最高。東北雷公藤只有一個(gè)居群，其多態(tài)位點(diǎn)百分率為19.53％居群間非常高的分化提供了豐富的遺傳多樣性，這也為進(jìn)一步尋找有優(yōu)良的種質(zhì)資源提供了前提。 4：總DNA提取影響因素：在雷公藤幼葉硅膠干燥樣品的總DNA的提取過(guò)程中，首次發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)樣品量和2×CTAB提取體系中β-巰基乙醇的濃度影響總DNA的提取。實(shí)驗(yàn)樣品量越大、β-巰基乙醇濃度