染色體驅動蛋白KIF4A通過與細胞膜蛋白supervillin的相互作用影響胃癌細胞的遷移侵襲.pdf

1、胃癌是全國范圍內致死率最高的惡性疾病之一，胃癌轉移是導致其高致死率的主要因素。目前對于胃癌發(fā)病機制及其治療方面已有廣泛研究，但是對于胃癌依舊沒有很好的治療方法，胃癌仍然是威脅人類生命健康的重大疾病之一。為了探討臨床胃癌轉移的分子機制，尋找潛在的有效治療胃癌的分子靶點，我們在前期工作基礎上，深入研究了驅動蛋白分子KIF4A對胃癌細胞遷移侵襲的調控。
　　研究表明，驅動蛋白分子KIF4A是保證細胞正常分裂的一個關鍵蛋白，KIF4A的表

2、達異常會導致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。然而KIF4A參與調控腫瘤轉移過程鮮見報道，我們深入研究了KIF4A蛋白分子對胃癌細胞的遷移侵襲的調控作用，進而闡明KIF4A在調控腫瘤轉移過程中的分子作用機制。
　　Supervillin(SVIL)是一種與F-actin結合的膜蛋白，為外周膜蛋白，普遍表達于人體各組織，有研究表明，SVIL在腫瘤細胞的侵襲過程中起到一定的作用，并且通過酵母雙雜交實驗證明了其在細胞內能與KIF4A相結合，因此猜想是否

3、KIF4A調控腫瘤細胞轉移過程的分子機制與SVIL有關，并對這一假設做了相關的實驗驗證。
　　本研究工作從以下幾個方面進行展開:
　　1.我們利用脂質體2000分別轉染pGPU6-GFP-KIF4A和pGPU6-GFP-NC質粒以及pEGFP-C1、pEGFP-KIF4A和pEGFP-SVIL的質粒于SGC-7901細胞中，利用G418進行篩選，構建出了KIF4A低表達SGC穩(wěn)篩細胞株、KIF4A高表達SGC穩(wěn)篩細胞株、SV

4、IL高表達SGC穩(wěn)篩細胞株以及兩個對照細胞株，并通過Western Blot和免疫熒光染色鑒定這幾個穩(wěn)篩的細胞株。
　　2.運用KIF4A低表達胃癌細胞株和KIF4A高表達胃癌細胞株分別進行劃痕實驗和Transwell實驗，觀察KIF4A對胃癌細胞SGC-7901遷移的影響。
　　3.對KIF4A低表達胃癌細胞株和KIF4A高表達胃癌細胞株進行vinculin染色并進行計數(shù)，應用Origin8.0軟件作圖，觀察KIF4A對胃