柴苓湯對慢性環(huán)孢素A腎病大鼠腎臟炎性介質(zhì)的影響.pdf

1、目的：本研究通過觀察柴苓湯對慢性環(huán)孢素A腎病大鼠腎臟炎性介質(zhì)的影響，探討柴苓湯對CsA慢性腎毒性的保護作用及其機制，為該方在臨床應用提供實驗依據(jù)。
　　方法：本試驗研究選用健康、清潔級、雌性SD大鼠40只，體重約200g，適應性飼養(yǎng)一周后，隨機分為4組：對照組(A組Control group)、模型組(B組CsA group)、纈沙坦組(C組 Valsartan group)、中藥組(D組Chailing group)，每組各10

2、只。模型組給予CsA30mg·kg-1·d-1灌胃，對照組給予等容量橄欖油；此外，纈沙坦組予纈沙坦10mg·kg-1·d-1(阿拉伯膠制為混懸液)，中藥組予柴苓湯3g·kg-1·d-1，經(jīng)水溶解后灌胃給藥。每周末分別置代謝籠中取尿。第28天，斷頭取血，迅速離心，留取血清、血漿標本，-4℃保存，待用于血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的檢測，并計算肌酐清除率(Ccr)；迅速切取小塊腎臟組織固定，用于觀察腎臟病理改變；免疫組化采用ABC法檢

3、測單核細胞趨化蛋白-Ⅰ(MCP-Ⅰ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)；RT-PCR測定組織中MCP-ⅠmRNA、TNF-αmRNA的表達。
　　結果：
　　1柴苓湯對CsA慢性腎毒性大鼠腎功能的影響環(huán)孢素組大鼠尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)較對照組明顯升高(P<0.01)，肌酐清除率(Ccr)較對照組明顯降低(P<0.01)。用藥后，纈沙坦組和中藥組尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)較模型組明顯降低(P<0.01)，肌酐

4、清除率(Ccr)較模型組明顯升高(P<0.05)。
　　2腎組織病理形態(tài)學觀察HE染色結果：對照組腎小球、腎小管形體結構基本正常，腎間質(zhì)未見明顯異常。環(huán)孢素組腎小管上皮細胞變性、濁腫甚則壞死脫落，腎間質(zhì)水腫，大量炎性細胞浸潤。纈沙坦組及中藥組較模型組病理改變輕，腎小管上皮細胞濁腫，腎間質(zhì)有少量炎性細胞浸潤。Masson染色結果：對照組腎小管基底膜結構清晰正常，腎間質(zhì)膠原沉積未見明顯異常。環(huán)孢素組結構紊亂，腎小管基底膜增厚、扭曲、斷

5、裂，大量膠原纖維沉積，表現(xiàn)出明顯的間質(zhì)纖維化特征。纈沙坦組及中藥組病理改變較輕，間質(zhì)膠原成分輕度增多。
　　3腎間質(zhì)纖維化評估模型組大鼠纖維化程度較對照組明顯升高(P<0.05)。用藥后，纈沙坦組及中藥組纖維化程度較模型組明顯降低(P<0.05)，但兩組之間無明顯差異。
　　4腎間質(zhì)炎性細胞計數(shù)與對照組比較，模型組大鼠炎性細胞浸潤明顯增多(P<0.05)。與模型組相比，纈紗坦組、柴苓湯組大鼠炎性細胞浸潤減少有顯著性差異(P<

6、0.05)。與髓質(zhì)區(qū)相比，皮質(zhì)區(qū)炎性細胞浸潤明顯增多有顯著性差異(P<0.05)；除外空白組，其他各組間，皮髓交界區(qū)較髓質(zhì)區(qū)炎性細胞浸潤減少有顯著性差異(P<0.05)。
　　5免疫組化法檢測單核趨化蛋白-1(MCP-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)與對照組比較，模型組大鼠MCP-1及TNF-α蛋白水平明顯增強(P<0.05)，與模型組相比，纈紗坦組、柴苓湯組大鼠MCP-1及TNF-α減少有顯著性差異(P<0.05)。MCP-

7、1主要表達于腎小管上皮細胞基底側，TNF-α主要表達于腎小管上皮細胞內(nèi)。
　　6 RT-PCR檢測單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)mRNA、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)mRNA與對照組比較，模型組大鼠MCP-1 mRAN和TNF-αmRAN表達明顯升高(P<0.05)。與模型組相比，纈紗坦組、柴苓湯組大鼠MCP-1mRAN和TNF-α mRNA表達下降有顯著性差異(P<0.05)。柴苓湯組與纈沙坦組無顯著性差異(P>0.05)

8、。
　　7炎性細胞介質(zhì)與纖維化相關性分析將兩組大鼠腎組織MCP-1、TNF-α表達水平分別與相應的纖維化指標進行相關性分析，結果顯示，MCP-I、TNF-α表達水平與腎小管間質(zhì)纖維化評分，均存在正相關，相關系數(shù)分別為0.755，0.812，P均<0.05。
　　結論：
　　1本研究采用SD雌性大鼠，普通飲食，CsA30mg·kg-1·d-1灌胃4周建立CsA慢性腎毒性大鼠模型，實驗大鼠尿素氮、血肌酐升高，肌酐清除率降低