大腸桿菌與嗜熱桿菌Tat系統(tǒng)基因物種專一性位點(diǎn)改造的初探.pdf

1、蛋白質(zhì)TaT轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)不同于細(xì)菌中普遍存在的Sec轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng),而與植物葉綠體中蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的ΔpH依賴系統(tǒng)相似.通過Tat系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)的蛋白質(zhì)底物的雙精氨酸保守序列核心為S/T-R-R-x-F-L-K的信號(hào)肽.TatA、TatB、TatC和TatE四種蛋白質(zhì)參與了大腸桿菌的Tat轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng).被轉(zhuǎn)運(yùn)的底物蛋白質(zhì)絕大多數(shù)為與細(xì)菌厭氧呼吸有關(guān)的含氧化還原輔酶因子的酶,并以折疊形式轉(zhuǎn)運(yùn).對(duì)細(xì)菌的周質(zhì)蛋白雙精氨酸運(yùn)輸系統(tǒng)(Tat系統(tǒng))的研究發(fā)現(xiàn)大腸桿菌的Ta

2、t系統(tǒng)的缺陷型對(duì)SDS(十二烷基磺酸鈉)敏感,其SDS濃度與大腸桿菌的存活率之間呈現(xiàn)良好的相關(guān)性.由于Tat系統(tǒng)還具有物種專一性,不同物種的Tat系統(tǒng)基因之間不具備功能互補(bǔ)性,該研究嘗試對(duì)大腸桿菌與嗜熱桿菌Tat系統(tǒng)基因物種專一性位點(diǎn)進(jìn)行了初步的遺傳改造.嗜熱桿菌具有2個(gè)拷貝的tatC基因和一個(gè)拷貝的tatA基因,且其中一個(gè)tatC基因和tatA基因緊密相連.將tatA和tatAC基因分別克隆到質(zhì)粒pET22上,構(gòu)建成質(zhì)粒p8773和p

3、8774,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌Tat系統(tǒng)缺陷型菌株中,雖然大腸桿菌和嗜熱桿菌和Tat系統(tǒng)基因具有60﹪以上的同源性,但TMAO(三甲基N氧化還原氨)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們不能互補(bǔ)大腸桿菌的Tat系統(tǒng)缺陷型功能.同時(shí)測(cè)定了SDS敏感度曲線,也驗(yàn)證了其功能不能互補(bǔ)的性質(zhì).結(jié)果還顯示了嗜熱桿菌tatC和tatAC基因在互補(bǔ)功能中的差異.根據(jù)SDS敏感度曲線,選取4﹪的SDS敏感濃度為指標(biāo)進(jìn)行誘變,探討了大腸桿菌和嗜桿菌Tat功能互補(bǔ)系統(tǒng)的構(gòu)建方法,期望找