小鼠抗蛋清提取物單克隆抗體的制備與初步鑒定.pdf

1、目的：制備和初步鑒定小鼠抗雞蛋清提取物單克隆抗體。 方法：以純化后的蛋清提取物為免疫原，經(jīng)背部皮下多點(diǎn)注射免疫BALB/c小鼠。采用棋盤滴定法確定抗原的最佳包被濃度，并通過間接ELISA法檢測(cè)免疫小鼠血清效價(jià)，選取血清效價(jià)高的小鼠用于單克隆抗體的制備。無菌分離免疫小鼠脾臟，制成單個(gè)細(xì)胞懸液，與小鼠骨髓瘤NS-1細(xì)胞融合。通過間接ELISA法篩選10株陽性融合孔中的融合細(xì)胞，采用有限稀釋法進(jìn)行克隆與業(yè)克隆培養(yǎng)：間接ELISA法篩選

2、可特異性分泌抗蛋清提取物單克隆抗體(McAb)的雜交瘤細(xì)胞：增量培養(yǎng)法制備單克隆抗體；Ig類與亞類鑒定試劑盒鑒定McAb的Ig類與亞類；間接ELISA法檢測(cè)雜交瘤細(xì)胞凍融前后產(chǎn)生McAbs的效價(jià)；Western blot鑒定McAbs的特異性。 結(jié)果：采用棋盤滴定法確定抗原的最佳包被濃度為100 ng·mL-1。經(jīng)克隆及3～4輪亞克隆，8株克隆失去產(chǎn)生抗體的能力，最終獲得2株可穩(wěn)定分泌抗蛋清提取物McAb的雜交瘤細(xì)胞，分別命名為

3、5E12和4F1；其分泌的McAb均為IgG1。Western blot分析表明，McAb 4F1可與轉(zhuǎn)印至膜上的蛋白形成單一條帶，所識(shí)別的靶分子的相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)約為44KD。間接ELISA法檢測(cè)兩株細(xì)胞凍融前后所產(chǎn)生的McAb5E12、4F1的效價(jià)分別為1:5000、1:300。 結(jié)論：成功地制備了兩株抗蛋清提取物McAb 5E12和4F1，為下一步制備、純化特異性抗蛋清提取物單克隆抗體提供了雜交瘤細(xì)胞，并為進(jìn)一步建立快