烏骨雞多肽產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)及其黑色素提取和含量測(cè)定研究.pdf

1、烏骨雞((Gallus gallus domesticus brisson)屬于鳥綱、雞形目、雉科、雞屬，是我國(guó)特有的藥用保健雞種，主要產(chǎn)于江西省泰和縣武山。作為傳統(tǒng)中藥，既可單獨(dú)食用又可配藥入復(fù)方，具有補(bǔ)肝腎、益氣血、退虛熱、治心腹痛等功效。 在《本草綱目》中記載：烏骨雞藥用效果與雞皮、肉、骨的黑色深淺有關(guān)，其顏色愈深者，入藥愈佳。由此可見烏骨雞的獨(dú)特作用與體內(nèi)的黑色素有一定關(guān)系。當(dāng)今發(fā)展雞肉深加工是雞肉加工業(yè)的必然趨勢(shì)，利

2、用酶技術(shù)處理雞肉是提高其資源利用率和附加值的一種有效途徑。就文獻(xiàn)和市場(chǎng)調(diào)查結(jié)果可知，目前還沒有烏骨雞活性多肽類及黑色素的產(chǎn)品，特別是烏骨雞黑色素產(chǎn)品檢測(cè)手段發(fā)展緩慢，使開發(fā)烏骨雞黑色素產(chǎn)品受到一定的阻礙。基于前人的研究成果和烏骨雞的研究現(xiàn)狀，本文對(duì)烏骨雞多肽產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)成分和理化指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。并通過比較不同提取方式對(duì)烏骨雞黑色素產(chǎn)物的影響，確定合理的黑色素提取方式。同時(shí)建立可靠、穩(wěn)定的烏骨雞黑色素含量分析方法。 為烏骨雞多肽及黑

3、色素新產(chǎn)品和基料開發(fā)奠定了應(yīng)用基礎(chǔ)，其主要研究結(jié)果概括如下： 1．對(duì)三種烏骨雞生物多肽中總蛋白和游離氨基酸含量等產(chǎn)品理化質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，為建立三種烏骨雞生物多肽產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)。檢測(cè)結(jié)果可見三種烏骨雞生物多肽干基基料中總蛋白質(zhì)含量分別為94.30±0.36％、96.15±O.68％、95.08±1.18％。游離氨基酸總量分別為：36.17±1.44％、7.66±0.61％、24.29±0.97％。多肽含量分別為：53.8

4、0±0.87％、75.59±0.44％、46.90±1.13％?？梢姰a(chǎn)品中蛋白質(zhì)含量豐富，多肽含量高，屬于一種高營(yíng)養(yǎng)的蛋白來源。 2．建立凝膠色譜法對(duì)三種烏骨雞生物多肽的重均分子量、數(shù)均分子量和分子量分布進(jìn)行探討。凝膠色譜條件為：色譜柱：Saphadex peptide column10/300GL(300 mm×7.8 mm)；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖溶液(0.01mol/L NaH<,2>PO<,4>；0.01mol/L Na<

5、,2>HPO<,4>；0.01mol/L NaCl pH=6.86)；溫度：35℃；流速：0.5 mL/min；進(jìn)樣體積：20μl；檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)為220 nm。使用GPC軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，根據(jù)一階擬合線性回歸所得到分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：LogMw=-0.184V+5.70(V：洗脫體積、R=0.995)。多肽分子量大小與其洗脫體積的線性很好，適宜多肽產(chǎn)品分子量的測(cè)定。 3．通過電鏡掃描、ICP-AES、紅外掃描、抗氧化體系等對(duì)鹽

6、酸水解和蛋白酶酶解所得烏骨雞黑色素進(jìn)行觀察和比較。結(jié)果表明，蛋白酶酶解法提取烏骨雞黑色素能較好保持其原有結(jié)構(gòu)和保留所含微量元素，可認(rèn)為是較為理想的提取烏骨雞黑色素的途徑。蛋白酶對(duì)肌肉蛋白水解溫和，殘留蛋白質(zhì)含量較高，但另一方面溫和水解對(duì)橢圓的烏雞黑色素顆粒不造成破壞，而鹽酸處理會(huì)使黑色素形成不定形結(jié)構(gòu)。烏骨雞黑色素中含有大量礦物質(zhì)和微量元素。鹽酸提取黑色素中的元素含量明顯較蛋白酶提取黑色素低，且蛋白酶提取的黑色素較鹽酸提取的黑色素有更強(qiáng)

7、的抗氧化能力，這些都可能與其結(jié)構(gòu)沒有被破壞有關(guān)?？梢姷鞍酌该附馓崛豕请u黑色素是較為合理的提取方法。 4．采用HPLC-MS鑒定烏骨雞真黑色素氧化后產(chǎn)物中的2,3,5-三羧基吡咯(PTCA)，并建立HPLC法測(cè)定烏骨雞真黑色素氧化后PTCA含量，經(jīng)試驗(yàn)確定色譜條件為：色譜柱為Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5μm)；檢測(cè)波長(zhǎng)為270.nm；進(jìn)樣量為20 μL；流動(dòng)相A：1％甲酸，流動(dòng)相B：甲醇，梯度洗脫；