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文檔簡介
1、目的:探索含人天冬氨酸-β-羥化酶(aspartate-β-hydroxylase,ASPH)基因的重組腺病毒轉導未成熟樹突狀細胞(immature dendritic cells, imDCs)誘導細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)對肝癌細胞系SMMC-7721的體外殺傷效應。
方法:C57BL/6小鼠骨髓分離培養(yǎng) DCs,重組腺病毒(Ad-ASPH-IRES2-EGFP)感染未成
2、熟DCs制備DCs疫苗,分為三組:Ad-ASPH-IRES2-EGFP感染未成熟 DCs組( DCs-ASPH組)、Ad-IRES2-EGFP感染未成熟DCs組(DCs-GFP組)和未成熟DCs組(imDCs組),各組DCs中ASPH蛋白的表達采用Western blot檢測、ASPH mRNA的表達采用real-time PCR檢測,流式細胞術檢測成熟DCs表型變化。分離同一來源的小鼠脾 T淋巴細胞,流式細胞儀測定其表面特異性分子表達
3、量,DCs疫苗誘導產(chǎn)生CTLs后與SMMC-7721細胞混合培養(yǎng),采用CCK-8法、流式細胞術檢測CTLs對SMMC-7721細胞的殺傷作用,ELISA檢測CTLs上清液中IFN-γ含量。
結果:成功培養(yǎng)出 DCs并制備 DCs疫苗,ASPH蛋白和 ASPH mRNA在DCs-ASPH組中高表達,DCs-ASPH組DCs細胞表面標志物CD80、MHCⅡ和CD11c顯著高于DCs-GFP組和imDCs組。總T淋巴細胞純度 CD3
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