觀察GnRH類似物調(diào)控大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞annexin5、3β-HSD的表達(dá)及不同pH精子營(yíng)養(yǎng)液對(duì)男性精子功能的影響.pdf

1、大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞主要分布在生精小管間的結(jié)締組織中，約占睪丸重量的2％，但分泌的睪酮卻占睪酮總量的95％。間質(zhì)細(xì)胞的主要功能是合成和分泌睪酮，以調(diào)節(jié)生精作用、雄性第二性征和全身代謝。促性腺激素釋放激素(gonadotropin releasing hormones，GnRH)是由下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞體合成并由其末端直接分泌入垂體門(mén)脈系統(tǒng)的一種十肽化合物，同時(shí)它選擇性地刺激促性腺細(xì)胞釋放促性腺激素LH和FSH。GnRH類似物是人工合成的九肽激素

2、，基于對(duì)垂體GnRH-R的作用將其分為激動(dòng)劑(GnRHa)與拮抗劑(GnRHant)。人工合成的CnRHa與GnRH受體有高度的親和力，并可抵抗內(nèi)肽酶的降解而延長(zhǎng)半衰期，產(chǎn)生類似于GnRH的作用；GnRHant主要是抑制促性腺激素的釋放，從而抑制生物體的性腺功能，它可能是通過(guò)直接抑制GnRH受體功能而發(fā)揮上述作用的。 膜聯(lián)蛋白5(annexin 5)是一種鈣離子依賴的磷脂結(jié)合蛋白，其分子量大約為36kD,是膜聯(lián)蛋白家族最主要的成

3、員之一。3β-羥類固醇脫氫酶(3β-HSD)是類固醇激素合成中睪丸所獨(dú)有的酶，催化睪酮合成的最后一步，它是鑒定睪丸間質(zhì)細(xì)胞的重要性指標(biāo)。已有研究表明，睪丸間質(zhì)細(xì)胞存在GnRH受體，并且發(fā)現(xiàn)睪丸間質(zhì)細(xì)胞也有annexin 5的存在。睪丸局部注射超生理劑量的GnRH類似物，24h后，發(fā)現(xiàn)睪丸內(nèi)annexin 5的表達(dá)下降。生理劑量的GnRH類似物睪丸局部注射后，睪丸內(nèi)armexin 5的表達(dá)升高，這些研究結(jié)果表明GnRH對(duì)睪丸中annexi

4、n 5的表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用。 考慮到GnRH受體和annexin 5在間質(zhì)細(xì)胞的存在。我們分析，GnRH類似物對(duì)annexin 5的表達(dá)可能是通過(guò)和間質(zhì)細(xì)胞上GnRH受體作用，而影響到間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的annexin 5表達(dá)的。為此，我們觀察了GnRH類似物對(duì)原代培養(yǎng)的大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞中annexin 5、3β-HSD表達(dá)的影響。通過(guò)原代培養(yǎng)大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞，觀察不同濃度的GnRH類似物處理間質(zhì)細(xì)胞后，annexin 5、3β-HSD在

5、基因和蛋白質(zhì)水平的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)不同終濃度的GnRHa處理細(xì)胞后，annexin 5、3β-HSD的表達(dá)均升高，當(dāng)GnRHa為10-5mol/L，10-6mol/L時(shí)，實(shí)驗(yàn)組大鼠睪丸問(wèn)質(zhì)細(xì)胞中annexin 5、3β-HSD mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)顯著高于對(duì)照組(未加GnRHa處理)。當(dāng)GnRHa為10-7mol/L時(shí)，實(shí)驗(yàn)組大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞中annexin 5、3β-HSD mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)也升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)不同濃度

6、的GnRHant處理細(xì)胞后，annexin 5、3β-HSD的表達(dá)均有下降，當(dāng)GnRHant的終濃度為10-6mol/L，10-7mol/L時(shí)，實(shí)驗(yàn)組大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞中annexin 5、3β-HSD mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)均顯著降低，與對(duì)照組比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 GnRH類似物對(duì)原代培養(yǎng)的睪丸間質(zhì)細(xì)胞中annexin 5、3β-HSD表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，可能是GnRH直接與睪丸間質(zhì)細(xì)胞上的GnRH受體相結(jié)合，啟動(dòng)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路