凋亡抑制蛋白hIAP-2和Survivin的基因功能及其siRNA的抑癌機制研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文凋亡抑制蛋白hIAP-2和Survivin的基因功能及其siRNA的抑癌機制研究姓名：李莉萍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：羅超權(quán)20041018凋亡抑制蛋白h l A P - 2 和s u r v w i n 的基因功能及其蝴N A 的抑癌胡制研究 中文l 要二、I W r T 法測定細(xì)胞增殖，m U 6 ／s u r v i v i n 質(zhì)粒與m U 6 ／h I A P ．2 質(zhì)粒均能夠顯

2、著地抑制癌細(xì)胞增殖，而對正常細(xì)胞L - 0 2 和N I H 3 T 3 沒有明顯的抑制作用，顯示其良好的腫瘤特異性。三、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡，結(jié)果顯示m U 6 ／s u r v i v i n 質(zhì)粒與m U 6 ，I l I A P ．2 質(zhì)粒均阻滯M C F ．7 細(xì)胞周期在G 1 期，細(xì)胞凋亡不明顯。四、熒光顯微鏡觀察H o e c h s t 染色細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，m U 6 ／s u r v i v i n 質(zhì)?；?/p>

3、m U 6 ／h l A P ．2 質(zhì)粒作用后，均使M C F 一7 細(xì)胞產(chǎn)生大量的多核、核腫脹細(xì)胞，提示細(xì)胞裂亡可能是其造成細(xì)胞增殖抑制的主要原因。五、W e s t e r n b l o t 檢測細(xì)胞總蛋白中c a s p a s e ．3 、C y t C 、p 2 1 w m 、N F - 《．．B 和1 w B , x等多種相關(guān)基因的蛋白質(zhì)水平變化，用c a s p a s e ．3 底物A C - D E V D ．p N

4、 A 檢測c a s p a s e ．3 活性o m U 6 ／s u r v i v i n 質(zhì)粒與m U 6 ／h l A P 一2 質(zhì)粒均使c a s p a s e ．3 活化，p 2 1 w m和I K ．B , a - 蛋白表達(dá)水平上調(diào)。m U 6 ／s u r v i v i n 質(zhì)粒使C y t C 蛋白表達(dá)上調(diào)，N F - r ．B 蛋白表達(dá)未見明顯變化，推測其作用機制與線粒體凋亡路徑有關(guān)，而m U 6 ／h I A

5、 P ．2質(zhì)粒使N F 甜j 蛋白表達(dá)下調(diào)，C y tC 蛋白表達(dá)未見明顯變化，推測其作用機制與N F - r ．B 路徑有關(guān)。六、m U 6 ／s u r v i v i n 質(zhì)粒與m U 6 ／h l A P 一2 質(zhì)粒協(xié)同抑制M C F ．7 細(xì)胞增殖，促進(jìn)D N A 的裂解，H o e c h s t 染色除看到大量的多核、巨核細(xì)胞外，還可看到散在分布的凋亡細(xì)胞。W e s t e r n b l o t 結(jié)果顯示，C y tC

6、 、c a s p a s e 一3 原、p 2 1 w “n 和b ^ B 口蛋白表達(dá)水平上調(diào)，N F 柏蛋白表達(dá)下調(diào)，c a s p a s e - 3 活性升高。七、m U 6 ／s u r v i v i n 質(zhì)粒、m u 6 ／h I A P 一2 質(zhì)粒分別與多種常用腫瘤化療藥物合用，結(jié)果顯示它們均能顯著地增強D N A 功能抑制劑順鉑和環(huán)磷酰胺的抑癌作用，但對順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡沒有促進(jìn)作用；m U 6 ／s u r v i