成人急性淋巴細胞白血病預后分子標記CRLF2和SH2B3特征研究.pdf

1、第一部分成人急性淋巴細胞白血病CRLF2突變特點、表達水平及其臨床意義
　　目的:細胞因子受體樣因子2（cytokine receptor-like factor2，CRLF2）可促進早期B淋巴細胞的增殖，對正常B淋巴細胞的發(fā)育起著重要的作用。本研究將探討成人急性淋巴細胞白血?。╝cute lymphoblastic leukemia，ALL）中CRLF2突變特點、表達水平及其與預后關系。
　　方法:本研究通過聚合酶鏈式反應

2、(polymerase chain reaction，PCR)方法，特異性擴增129例成人ALL患者CRLF2外顯子(exon)1-6，對擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳鑒定、DNA純化、sanger測序，并將測序結果與基因庫比對，分析突變類型、突變發(fā)生率及其臨床特點。通過實時熒光定量PCR(real-time PCR)方法，檢測CRLF2表達水平。分析CRLF2在B-ALL、T-ALL以及正常對照之間可能存在的表達差異。分析CRLF2表達水

3、平與IKZF1缺失可能存在的關系及其臨床意義。統(tǒng)計學分析采用SPSS20.0軟件，計量資料采用非參數(shù)Mann-Whitney檢驗，計數(shù)資料采用x2檢驗（或Fisher精確檢驗），采用Kaplan-Meier檢驗對ALL患者進行生存分析及預后關系研究。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:本組CRLF2共檢測到6種基因改變類型，其中P224L、R186S提示預后良好，L86I、 F232F、W255C可能與預后不良有關。在無I

4、KZF1缺失的患者中，A11A突變組的RFS明顯長于野生型組。CRLF2在ALL患者表達水平明顯高于正常人。CRLF2高表患者預后較差，總生存期明顯低于CRLF2低表組。CRLF2表達水平與IKZF1缺失有關，IKZF1缺失患者的CRLF2表達水平明顯高于無IKZF1缺失患者。提示CRLF2與IKZF1之間可能存在功能上的聯(lián)系。
　　結論:CRLF2突變及表達水平異常在成人ALL的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，本組檢測到的新型突變R18

5、6S、 P224L與預后良好有關，CRLF2表達水平增高往往提示不良預后。
　　第二部分 SH2B3在中國成人急性淋巴細胞白血病中的突變研究
　　目的:SH2B3(Src homology2 B3)編碼SH2配體適應蛋白LNK，可以抑制JAK-STAT信號通路和細胞因子信號通路的激活，SH2B3的失活突變，可以導致JAK-STAT信號通路激活，從而引起急性淋巴細胞白血病(acute lymphoblasticleukemia

6、，ALL)的發(fā)生。本組將研究成人ALL患者SH2B3突變特征及其臨床意義。
　　方法:使用PCR及巢式PCR的方法，特異性擴增SH2B3外顯子，其后進行DNA純化、測序，測序結果與NCBI-BLAST進行比對，分析突變類型、突變發(fā)生率及其臨床特點。統(tǒng)計學分析采用SPSS20.0軟件，計量資料采用非參數(shù)Mann-Whitney檢驗，計數(shù)資料采用x2檢驗（或Fisher精確檢驗），采用二元Logistic回歸、Kaplan-Meier

7、檢驗、COX回歸對ALL患者進行生存分析及預后關系研究。P＜0.05認為有統(tǒng)計學意義。
　　結果:本組107例初發(fā)ALL患者共檢測到兩種基因改變類型，c.724C＞T，p.P242S及c.784T＞C，p.W262R。經(jīng)過比對，兩種基因改變均為單核苷酸多態(tài)性(Singlenucleotide polymorphisms，SNP)類型，分別為rs3184504和rs78894077。其中SH2B3 P242S基因改變組的EFS、OS