鼠李糖乳桿菌上調(diào)腸上皮細胞及小鼠結(jié)腸5-羥色胺轉(zhuǎn)運體表達.pdf

1、目的：腸易激綜合征（Irritable Bowel Syndrome,IBS）是消化科一種常見的以腹痛、腹脹、腹部不適同時伴有排便習(xí)慣和性狀改變?yōu)橹饕攸c的下消化道疾病，是最常見的一種功能性胃腸病，人群發(fā)病率較高，其病情及癥狀持續(xù)反復(fù)，嚴重影響及困擾著患者的身心健康及生活質(zhì)量。5-羥色胺轉(zhuǎn)運體（serotonin transporte,SERT）是一種跨膜轉(zhuǎn)運蛋白，廣泛分布于腸道EC細胞及神經(jīng)突觸前膜上，其作用是將效應(yīng)部位過多聚集的5-

2、羥色胺(5-hydroxytryp tamin，5-HT)再攝取，從而終止5-HT的作用，并為合成新的5-HT提供底物，在IBS的發(fā)病中有著重要的作用。文獻報道，SERT基因多態(tài)性可影響SERT表達，從而在IBS亞型的發(fā)生發(fā)展中起作用。然而，除基因本身之外，腸道微生態(tài)環(huán)境的改變也可能對SERT的表達產(chǎn)生影響。臨床上應(yīng)用益生菌治療腹瀉型及感染后腸易激綜合征取得了顯著療效。益生菌是否能夠調(diào)控SERT表達及其調(diào)控機制尚不清楚。鼠李糖乳桿菌LG

3、G（Lactobacillus rhamnosus GG）是臨床實驗上研究比較多的益生菌之一。本研究通過采用鼠李糖乳桿菌上清液（Lactobacillus rhamnosus GG supernatant，LGG-s）對HT-29和Caco-2細胞及C57BL/6小鼠進行干預(yù)，并檢測SERTmRNA及SERT蛋白表達情況，探討鼠李糖乳桿菌上清是否會影響SERT的表達，從而為益生菌緩解IBS的可能的機制提供新的方向。
　　方法：

4、r>　　（1）應(yīng)用3種不同稀釋濃度的鼠李糖乳桿菌上清液LGG-s(ATCC53103)和LGG-s(CGMCC1.3724)分別干預(yù)HT-29細胞和Caco-2細胞12小時和24小時；
　?。?）將48只雌性C57BL/6小鼠分為4組，一組為對照組，給予正常飲用水，其他三組分別予以未稀釋LGG-s(ATCC53103)，2倍稀釋的LGG-s(ATCC53103)和3倍稀釋的LGG-s(ATCC53103)。小鼠處理持續(xù)時間分別為1

5、周、2周、3周及4周。每周每組處死3只小鼠取其結(jié)腸備用。應(yīng)用RT-PCR及Western-blot來檢測HT-29細胞、Caco-2細胞及小鼠結(jié)腸組織的SERT mRNA及SERT蛋白的表達水平。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS21.0統(tǒng)計學(xué)軟件包進行分析，計量資料用均數(shù)±標準差（x?s）來表示；計量資料3組以上組間比較用單因素方差分析，方差齊性時用LSD檢驗，方差不齊時用Dunnett T3法檢驗，均以P<0.05認為有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　

6、結(jié)果：LGG-s(ATCC53103)干預(yù)HT-29細胞和Caco-2細胞24小時，其SERT mRNA和SERT蛋白的表達水平與對照組相比明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　動物實驗中，未稀釋LGG-s(ATCC53103)組第一周末SERT mRNA水平明顯升高，是對照組的9.4倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000，P＜0.05），第二周末 SERT mRNA水平快速下降至接近對照組水平；2倍稀釋LGG-s(AT

7、CC53103)在前兩周和第四周均能上調(diào) SERT mRNA的表達，第三周SERT mRNA水平低于對照組水平，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000, P=0.006, P=0.007，均P＜0.05）。3倍稀釋的LGG-s(ATCC53103)在前3周對SERT mRNA無上調(diào)作用，在第4周SERT mRNA水平輕度升高，是對照組的1.6倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。整個實驗中，未稀釋 LGG-s(ATCC53103)對 SER

8、T蛋白水平無明顯影響，2倍稀釋LGG-s(ATCC53103)組的SERT蛋白水平均高于對照組，但稍有波動。而3倍稀釋LGG-s(ATCC53103)組，前兩周SERT蛋白表達與對照組無明顯差異，第三周和第四周明顯高于對照組。
　　結(jié)論：
　　(1) LGG-s(ATCC53103)能夠上調(diào)腸道上皮和小鼠腸道組織的SERT mRNA和SERT蛋白的表達；
　　(2) LGG-s(ATCC53103)上調(diào)SERT mRN