紫草羥基萘醌制備及其關鍵質(zhì)量問題研究.pdf

1、紫草是歷版中國藥典收錄的常用中藥。羥基萘醌類化合物具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗腫瘤等廣泛的藥理活性，是紫草清熱涼血、活血解毒等功效作用的有效部位，也是基于紫草進行創(chuàng)新藥物開發(fā)的重要原料。本論文以羥基萘醌為對象，以中藥五類新藥對有效部位的技術要求為指導，開展制備工藝和質(zhì)量控制的關鍵問題研究，為紫草的深入開發(fā)應用提供科學依據(jù)。
　　建立羥基萘醌制備工藝，首先以羥基萘醌色素含量為指標對紫草藥材品種和產(chǎn)地進行了篩選。然后以羥基萘醌總色素及含

2、量最高的單體成分β,β'-二甲基丙烯酰阿卡寧的含量和轉(zhuǎn)移率為指標，優(yōu)化羥基萘醌的乙醇提取工藝，并建立了羥基萘醌的石油醚萃取工藝條件，最終確立了以95％乙醇作為提取溶劑，石油醚萃取的方法進行羥基萘醌制備。根據(jù)藥典方法進行化學成分的測定，所制備羥基萘醌含量在90%以上，符合中藥五類新藥對有效部位的要求。制備工藝操作簡單，易于放大。
　　建立主要羥基萘醌單體成分及總量測定的 HPLC分析方法，并進行了系統(tǒng)的方法學驗證，與藥典收載的UV光

3、度總量測定法進行了比較。優(yōu)化了RP-HPLC分離條件，以四氫呋喃-乙腈-0.17%甲酸水溶液43:8:49（v/v/v）為流動相，在Alltima C18色譜柱（250mm×4.6 mm，5μm）上進行等度洗脫，首次實現(xiàn)了針對阿卡寧（AK）、乙酰阿卡寧（ACAK）、β-乙酰氧基異戊酰阿卡寧（AOAK）、去氧阿卡寧（DOAK）、β,β'-二甲基丙烯酰阿卡寧（DAAK）以及α-甲基丁酰阿卡寧（MBAK）和異戊酰阿卡寧（IVAK）這一對異構(gòu)體

4、在內(nèi)的7種主要紫草羥基萘醌成分的分離，色譜峰形良好，分離度均大于1.5，AK、ACAK、AOAK、DOAK、DAAK、MBAK、IVAK的線性范圍分別為2~40μg·mL-1、100~200μg·mL-1、1.3~26μg·mL-1、5~1000μg·mL-1、13~260μg·mL-1、5~100μg·mL-1、20~400μg·mL-1，線性關系良好，精密度、重復性和回收率均滿足定量分析要求，適用于羥基萘醌單體成分及總色素含量的測定

5、。羥基萘醌總色素含量測定結(jié)果與藥典收載的 UV光度總量測定法結(jié)果無顯著差異，但對于有效物質(zhì)成分群的物質(zhì)組成反映更為明確，因而對于產(chǎn)品的質(zhì)量控制更為科學、可靠。
　　羥基萘醌的指紋圖譜研究，我們以十批羥基萘醌產(chǎn)品為研究對象，以四氫呋喃-乙腈-0.17%甲酸水溶液43:8:49（v/v/v）為流動相，在Alltima C18色譜柱（250mm×4.6 mm，5μm）上進行等度洗脫分離，記錄518 nm下的色譜圖。并將十批羥基萘醌的色譜

6、圖導入國家藥典委員會中藥相似度評價系統(tǒng)2012版，生成了以 DAAK為參照羥基萘醌指紋圖譜，根據(jù)研究結(jié)果并考慮大生產(chǎn)的復雜性暫定羥基萘醌指紋圖譜的相似度應大于0.990。
　　綜上所述，我們研究了一種制備高純度羥基萘醌的提取工藝，該方法簡便可行，適用于工業(yè)生產(chǎn)。建立了一種 HPLC法測定包含一對同分異構(gòu)體在內(nèi)的羥基萘醌單體成分的含量測定方法，該方法建立明確羥基萘醌各單體成分的含量組成進行了準確的測定。生成了羥基萘醌 HPLC標準指