去氫表雄酮的生物法羥基化修飾研究.pdf

1、1α-羥基去氫表雄酮(1α-hydroxy dehydroepiandrosterone)是用于合成活性維生素D3及其類似物的一個(gè)重要的中間體?；钚跃S生素D3作用于多種靶組織,生理作用也多種多樣,廣泛用于治療骨質(zhì)疏松、甲狀旁腺亢進(jìn)(腎衰)、牛皮癬、癌癥以及免疫疾病等。在由去氫表雄酮半化學(xué)合成活性維生素D3類藥物的過程中,去氫表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)的1α-羥基化是首要步驟,也是最關(guān)鍵的步驟之一。<

2、br>　　 本文采用微生物轉(zhuǎn)化的方法對(duì)去氫表雄酮進(jìn)行1α-羥基化修飾。
　　 首先采用富集培養(yǎng)技術(shù)和梯度底物濃度定向篩選技術(shù)從土壤中篩選出能轉(zhuǎn)化去氫表雄酮為1α-羥基去氫表雄酮的菌株。通過形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)手段對(duì)該菌株進(jìn)行了鑒定,確定該菌為青霉屬的斜臥青霉。對(duì)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行確認(rèn),證實(shí)了轉(zhuǎn)化產(chǎn)物為1α-羥基化去氫表雄酮。
　　 通過紫外誘變等手段對(duì)篩選出的菌株進(jìn)行誘變處理,通過3輪紫外誘變得到了一株轉(zhuǎn)化率較高且遺傳較

3、穩(wěn)定的菌株。
　　 對(duì)ph-13的發(fā)酵和轉(zhuǎn)化條件的進(jìn)行了研究,結(jié)果表明種子培養(yǎng)基的最適碳氮源分別為葡萄糖、酵母浸粉；轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基的最佳碳氮源分別為蔗糖和硝酸鈉。孢子粉接到種子培養(yǎng)基中的最佳濃度為5×107個(gè)/mL。
　　 對(duì)ph-13轉(zhuǎn)化去氫表雄酮1α-羥基化工藝優(yōu)化后,得到了最佳轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方:蔗糖為4.75g/L,硝酸鈉為3.69g/L,硫酸鎂為0.3 g/L,硫酸錳為0.0001g/L,硫酸亞鐵為0.0001 g/L