gp150蛋白對盤基網(wǎng)柄菌多細(xì)胞發(fā)育期間DdPKA活性影響的研究.pdf

1、華東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文gp150蛋白對盤基網(wǎng)柄菌多細(xì)胞發(fā)育期間DdPKA活性影響的研究姓名：陳穎盈申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：動(dòng)物學(xué)指導(dǎo)教師：侯連生20080501DdPKA活性分別為9454U、14944U、10167U、18354U、8957U、11959U、11025U、16210U；AKl27細(xì)胞的DdPKA活性分別為10979U、12397U、16252U、19475U、19401U、18231U、14972U、18724U。實(shí)

2、驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，盤基網(wǎng)柄菌野生型細(xì)胞的DdPKA活性在12h、16h和20h有所升高，其變化趨勢與細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的分化有關(guān)。突變型AKl27細(xì)胞的DdPKA活性則一直保持在較高水平，直至22h才略有下降。但KAx3細(xì)胞和AKl27細(xì)胞發(fā)育24h的DdPKA活性都再一次升高，值得注意的是，此時(shí)KAx3細(xì)胞中已檢測不到gpl50蛋白?？傮w上，AKl27細(xì)胞的DdPKA活性要比KAx3細(xì)胞高。研究結(jié)果顯示，細(xì)胞可能因缺失gpl50蛋白而導(dǎo)致DdPK

3、A活性調(diào)控失去一定控制。在細(xì)胞分化過程(1620h)中，前柄細(xì)胞DdPKA活性依次為13053U、16148U、7210U，在1618h之間緩慢上升，但在20h急速下降；前孢子細(xì)胞DdPKA活性則為：15579U、10965U、14983U，在18h略有下降，但在20h又迅速恢復(fù)，活性約為前柄細(xì)胞的兩倍。由于前柄細(xì)胞最終將凋亡形成只有支撐孢子囊作用的空泡狀柄細(xì)胞，且凋亡過程涉及受PKA抑制的caspase凋亡通路，因此20h前柄細(xì)胞Dd

4、PKA活性的大大降低，與細(xì)胞為順利完成凋亡過程有密切聯(lián)系，凋亡細(xì)胞需要抑制DdPKA對caspase凋亡通路的影響，gpl50蛋白很可能在其中起到一定作用，因?yàn)榘l(fā)育20h的突變細(xì)胞DdPKA活性還是很高的。經(jīng)典信號通路模型指出，胞內(nèi)DdPKA主要受到膜蛋白腺苷酸環(huán)化酶的調(diào)控，粘附分子gpl50很可能作為信號通路中的一個(gè)關(guān)鍵蛋白，通過調(diào)節(jié)膜上各種腺苷酸環(huán)化酶來最終調(diào)控DdPKA的活性。為進(jìn)一步研究gpl50蛋白和DdPKA的關(guān)系，本論文利

5、用激光共聚焦技術(shù)開展細(xì)胞內(nèi)gpl50蛋白和DdPKA各亞基的共定位研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)gpl50蛋白與DdPKAR亞基在空間位置上更為靠近。由于發(fā)育12h和16h的細(xì)胞形態(tài)和分化程度差異明顯，同時(shí)其DdPKA活性的差異也很巨大，因此本研究主要采用這兩個(gè)時(shí)間段的細(xì)胞進(jìn)行共定位研究。發(fā)育12h細(xì)胞中g(shù)pl50蛋白與DdPKA各亞基均彌散分布在細(xì)胞質(zhì)中，但沒有明顯的重疊。DdPKA的兩種亞基彌散分布在除細(xì)胞核之外的胞質(zhì)部分，也沒有在細(xì)胞膜附近形成堆

6、積；gpl50蛋白的染色結(jié)果相對集中于核區(qū)附近，很可能是該蛋白進(jìn)行翻譯的場所，或者是轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的小泡結(jié)構(gòu)。發(fā)育16h細(xì)胞gpl50蛋白的免疫染色集中出現(xiàn)在細(xì)胞膜附近，此時(shí)DdPKA亞基的分布出現(xiàn)差異：DdPKAC亞基幾乎分布在細(xì)胞各個(gè)部分，但靠近細(xì)胞質(zhì)膜處染色偏深；而DdPKAR亞基主要聚集在細(xì)胞質(zhì)膜附近，在胞質(zhì)內(nèi)只有少量分布。gpl50蛋白和DdPKA各亞基的共定位結(jié)果顯示，在空間位置上，gpl50蛋白與DdPKAR亞基明顯重疊。這說明