肌動蛋白與RNA聚合酶Ⅱ的Rpb5，Rpb6和Rpb7亞基之間的相互作用.pdf

1、肌動蛋白是細胞骨架的組成部分，讓細胞流動和行使各種生理過程。肌動蛋白是典型真核細胞中的一種古老而豐富的蛋白質(zhì)，在某些類型的細胞中約占15％，從細胞遷移到膜運輸?shù)榷计鹬匾淖饔谩Ｔ?jīng)被認為只是肌肉的一個組成部分，目前認為真核細胞中普遍存在的成分。有證據(jù)表明，肌動蛋白存在于許多種真核細胞的細胞核中，行使多種功能，包括轉(zhuǎn)錄，胞質(zhì)運輸，參與染色質(zhì)和核結(jié)構(gòu)的構(gòu)建等。最近的體外研究表明，肌動蛋白，與轉(zhuǎn)錄復(fù)合體直接作用，為三個真核RNA聚合酶所參與

2、的轉(zhuǎn)錄早期所必需。但它的功能目前還不清楚，它的作用仍是一個有趣的問題。 在該領(lǐng)域需要更深入的是研究肌動蛋白如何與三種轉(zhuǎn)錄機器相互作用。這包括所有三個聚合酶的亞基，許多轉(zhuǎn)錄因子和每個聚合酶的其他結(jié)合蛋白，這可能有助于確定肌動蛋白在每個事件中真核細胞演化中，如何與基因轉(zhuǎn)錄復(fù)合體相互作用提供一些基本的見解。 在這項研究中，我們在大腸桿菌中構(gòu)建了pcDNA—HA—rpb重組質(zhì)粒，表達三個聚合酶Ⅱ亞基：Rpb5，Rpb6和Rpb7

3、，通過轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞293T，從而表達帶HA標簽的多肽，同時轉(zhuǎn)染不帶標簽的β—actin。在HeLa細胞中通過免疫熒光證明了β—肌動蛋白與RNA聚合酶Ⅱ亞基共定位。同時肌動蛋白與抗HA的抗體發(fā)生免疫共沉淀，表明二者在體內(nèi)的相互作用。通過利用在大腸桿菌中表達和純化的帶谷胱甘肽—S—轉(zhuǎn)移酶（GST）的融合蛋白Rpb5，Rpb6和Rpb7，針對β—肌動蛋白與RNA聚合酶Ⅱ亞基能否進行相互作用而作了體外的GST pull—down實驗。然而，