雷公藤紅素通過調(diào)控選擇素-P的表達(dá)抑制破骨細(xì)胞分化的研究.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 選擇素-P在破骨細(xì)胞分化過程中表達(dá)的研究
　　目的:
　　探討選擇素-P(seletin-P，SELP)在破骨細(xì)胞分化過程中的表達(dá)情況。
　　方法:
　　運(yùn)用RANKL誘導(dǎo)破骨前體細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞系分化成為破骨細(xì)胞，采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鑒定破骨細(xì)胞是否誘導(dǎo)成功。通過RT-PCR及western blot法檢測(cè)SELP在破骨細(xì)胞分化過程中表達(dá)

2、變化。建立CIA小鼠模型，采用RT-PCR法檢測(cè)CIA小鼠發(fā)病過程中骨髓原代細(xì)胞中選擇素-P的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　既往基因芯片結(jié)果顯示SOX5、SELP、Fcgr3a、C1r等多個(gè)基因在破骨細(xì)胞中表達(dá)明顯升高，通過RT-PCR驗(yàn)證SELP表達(dá)升高最為明顯。運(yùn)用RT-PCR和western blot法驗(yàn)證，SELP在誘導(dǎo)破骨前體細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化的第3天、5天較第0天均升高。SELP在CIA小鼠一次免疫后第35天和第4

3、5天的骨髓原代細(xì)胞中的表達(dá)較第11天和28天均升高。
　　結(jié)論:
　　SELP在破骨細(xì)胞分化過程中可能起著重要作用。
　　第二部分 選擇素-P對(duì)破骨細(xì)胞分化影響的研究
　　目的:
　　探討SELP對(duì)破骨細(xì)胞分化的影響。
　　方法:
　　siRNA-SELP慢病毒轉(zhuǎn)染沉默RAW264.7細(xì)胞中SELP基因后，運(yùn)用RANKL誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化，通過RT-PCR法檢測(cè)低表達(dá)SELP后誘導(dǎo)過程中破骨表面標(biāo)

4、志性基因的表達(dá)，同時(shí)通過TRAP染色觀察低表達(dá)SELP后破骨細(xì)胞分化情況。
　　結(jié)果:
　　與正常組相比，沉默破骨前體細(xì)胞中SELP基因后，RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞數(shù)目減少、體積減小，且破骨細(xì)胞表面標(biāo)志性基因的表達(dá)均明顯降低。
　　結(jié)論:
　　SELP參與調(diào)控破骨細(xì)胞分化，在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎骨侵蝕中發(fā)揮重要作用，抑制SLEP表達(dá)，可能成為RA治療新靶標(biāo)。
　　第三部分 雷公藤紅素對(duì)破骨細(xì)胞分化過程中選擇素-P表

5、達(dá)影響的研究
　　目的:
　　探討雷公藤紅素對(duì)破骨細(xì)胞分化過程中選擇素-P表達(dá)影響
　　方法:
　　采用CCK8法檢測(cè)雷公藤紅素（Celastrol，Cel）對(duì)RAW264.7細(xì)胞活性安全濃度范圍。通過TRAP染色觀察Cel對(duì)RAW264.7細(xì)胞經(jīng)過誘導(dǎo)向破骨細(xì)胞分化的影響，同時(shí)運(yùn)用RT-PCR法檢測(cè)Cel對(duì)RAW264.7細(xì)胞誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化過程中SELP表達(dá)的影響。建立CIA小鼠模型，觀察并記錄小鼠活動(dòng)、體重

6、、關(guān)節(jié)紅腫情況，于一次免疫后第28天起予以CIA小鼠Cel2mg/kg/天連續(xù)腹腔注射14天，收集小鼠骨髓原代細(xì)胞。通過RT-PCR法檢測(cè)Cel對(duì)小鼠骨髓原代細(xì)胞中SELP表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:
　　用0.3μM Cel干預(yù)破骨前體細(xì)胞誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化，發(fā)現(xiàn)Cel能夠明顯抑制破骨細(xì)胞的分化，RT-PCR結(jié)果提示分化過程中SELP的表達(dá)明顯降低。在CIA小鼠中，Cel治療組較未治療組，小鼠關(guān)節(jié)炎癥及骨侵蝕明顯減輕，RT-PC