蝦青素產(chǎn)生菌的篩選鑒定及其轉(zhuǎn)化子的研究.pdf

1、本課題從來(lái)源不同的腐葉土壤中分離出蝦青素產(chǎn)生菌株J1、J2、J3、J4、J5，通過(guò)真菌形態(tài)和發(fā)酵產(chǎn)物的鑒定，初步認(rèn)為它們同屬于紅酵母。經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的篩選得到高產(chǎn)菌株J3，它的蝦青素含量為397.0μg/gCDW。利用18SrRNA分子技術(shù)，根據(jù)真核生物18SrDNA保守區(qū)段設(shè)計(jì)出兩條引物,經(jīng)過(guò)PCR體系擴(kuò)增出大小為1774bp18SDNA序列，其G+C含量為46.96％，在Genebank中，進(jìn)行比對(duì)分析，進(jìn)一步確定該菌株J3是粘紅酵母，

2、并命名為粘紅酵母SJ?！　⊥ㄟ^(guò)電轉(zhuǎn)化技術(shù)，以2.0kV、25μF、200Ω作脈沖轉(zhuǎn)化的條件下，將雨生紅球藻的基因組DNA導(dǎo)入粘紅酵母SJ中，并以二苯胺，硫酸銅為篩選模型，獲得了色素含量772μg/gCDW的轉(zhuǎn)化子，是親本粘紅酵母SJ色素含量的1.95倍。應(yīng)用微生物形態(tài)學(xué)和RAPD技術(shù)，對(duì)轉(zhuǎn)化子的遺傳背景進(jìn)行鑒定?！　榱俗C實(shí)轉(zhuǎn)化子產(chǎn)量穩(wěn)定性，進(jìn)行了連續(xù)八代產(chǎn)量穩(wěn)定性試驗(yàn)。結(jié)果表明：第4代最高，第1代最低，兩者生物量相差4.83％、色