線粒體Src酪氨酸激酶和鋅離子轉(zhuǎn)運體Zip2在心肌缺血-再灌注損傷保護中的作用.pdf

1、第一部分：線粒體 Src酪氨酸激酶在離體大鼠心臟缺血預(yù)處理（Ischemic Preconditioning，IPC）保護中的作用
　　目的：雖然IPC以及其他一些心臟保護干預(yù)措施已經(jīng)被證實通過抑制再灌注期線粒體復(fù)合體I的活性而發(fā)揮其抗缺血/再灌注（Ischemia/Reperfusion，I/R）損傷心肌保護作用，但其調(diào)節(jié)線粒體復(fù)合體I活性的具體機制尚不清楚。本研究的研究目的是證明IPC通過激活線粒體Src酪氨酸激酶調(diào)節(jié)線粒體復(fù)

2、合體I的活性，進而發(fā)揮其抗I/R損傷心肌保護作用這一假設(shè)。
　　方法：為了建立離體大鼠心臟I/R損傷模型，雄性Wistar大鼠經(jīng)過麻醉后迅速取出心臟置于Langendorff裝置上，心臟經(jīng)歷30 min缺血和2 h再灌注。IPC組在長時間缺血之前經(jīng)歷3個循環(huán)的5 min缺血和5 min再灌注。TTC染色法測定心肌梗死面積。用Western blotting法檢測線粒體Src酪氨酸激酶Tyr416位點的磷酸化水平以檢測酶的活性。用復(fù)

3、合體I活性微量檢測試劑盒檢測線粒體復(fù)合體I的活性。用免疫共沉淀法檢測線粒體Src酪氨酸激酶是否與復(fù)合體I存在相互作用。結(jié)果與對照組相比，IPC明顯減小離體大鼠心臟的梗死面積，但是此作用被酪氨酸激酶選擇性抑制劑PP2（1μM）抑制。Western blotting結(jié)果顯示，缺血30 min及再灌注10 min后線粒體 Src酪氨酸激酶的Tyr416位點的磷酸化明顯減少。IPC可提高再灌注開始時線粒體Src酪氨酸激酶的磷酸化水平，但是此作用

4、被酪氨酸激酶抑制劑染料木黃酮（Genistein）所逆轉(zhuǎn)。與上述結(jié)果一致，IPC的抗I/R損傷作用也被酪氨酸激酶選擇性抑制劑PP2所抑制。另外，IPC通過激活Src酪氨酸激酶抑制再灌注時復(fù)合體I的活性。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)合體I與Src以及磷酸化Src發(fā)生共沉淀。IPC誘導(dǎo)復(fù)合體I UDUFS3亞單位蛋白酪氨酸的磷酸化，說明UDUFS3亞單位的蛋白酪氨酸磷酸化可能與IPC對復(fù)合體I的抑制作用有關(guān)。
　　結(jié)論：IPC通過激活線粒體S