攜帶CTTNBP2NL基因的重組腺病毒的抗癌研究.pdf

1、隨著生活壓力增大，環(huán)境污染加劇，惡性腫瘤的發(fā)病率越來越高，所以尋找一種高效治療方法已成為近年的研究重點(diǎn)。CTTNBP2NL(CTTNBP2N-terminallike)編碼的蛋白為N末端樣皮肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白2，與CTTNBP2同源，在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)生過程中起重要作用。又因?yàn)橄俨《驹诓《警煼ㄖ芯哂蟹€(wěn)定性好，宿主范圍廣，使用安全的優(yōu)點(diǎn)。
　　本研究將CTTNBP2NL基因插入到腺病毒載體上，構(gòu)建了非復(fù)制型重組腺病毒Ad-CTTNBP2N

2、L。利用MTT法檢測重組病毒對不同癌細(xì)胞系增殖有抑制作用。結(jié)晶紫實(shí)驗(yàn)觀察到重組腺病毒對癌細(xì)胞有很好的殺傷效果。通過Hoechst33258染色和流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)分析攜帶CTTNBP2NL基因的重組腺病毒可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。轉(zhuǎn)染pEGFP-LC3-C1到癌細(xì)胞后，感染重組病毒檢測癌細(xì)胞沒有自噬。Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白及自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)量，證明CTTNBP2NL基因通過凋亡途徑誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡。本實(shí)驗(yàn)為將CTTNBP2N

3、L基因運(yùn)用到癌癥的治療上提供了一定的理論基礎(chǔ)。在海洋自然資源中，海洋凝集素在治療癌癥方面具有很大的潛力。其中UPL1（Ulvapertusa lectin1）能夠?qū)t細(xì)胞起凝集作用，具有研究價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)在已有的研究基礎(chǔ)上對UPL1和細(xì)胞信號通路之間相互作用的關(guān)系做了進(jìn)一步的探究。通過IP檢測UPL1與PRMT5（精氨酸N端甲基化轉(zhuǎn)移酶5）、β-Tubulin、β-Actin的相互作用。利用激光共聚焦顯微鏡觀察UPL1和MEP50WD(W

4、DR77)的亞細(xì)胞定位。Western blot分別檢測感染了復(fù)制缺陷型腺病毒Ad-UPL1的BEL-7404、Huh7細(xì)胞系中ERK、p-ERK、Akt、p38、p-p38、STAT、p-STAT、ISG15的表達(dá)量，以及自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ的表達(dá)。EBSS饑餓處理誘導(dǎo)凋亡后，檢測UPL1對癌細(xì)胞的存活率的影響。利用U0126（MEK抑制劑）、SB203580(p38抑制劑)、LY294002（PI3K抑制劑）分別處