骨膜蛋白在慢性鼻-鼻竇炎不同表型中差異表達的實驗研究.pdf

1、依據(jù)EPOS2012，鼻鼻竇炎被定義為:鼻腔和鼻竇的炎癥，具有兩個或兩個以上的癥狀特征，其中一個必備條件是鼻塞/鼻堵，或鼻漏（前后鼻孔滴漏），可以伴或不伴面部疼痛/壓迫感、嗅覺減退或喪失;并且鼻內(nèi)鏡檢查所見:鼻腔息肉，并且/或伴有主要來源于中鼻道的黏膿性分泌物，并且/或伴有主要位于中鼻道的黏膜水腫或阻塞;或CT檢查:伴有竇口鼻道復合體和/或鼻竇的黏膜改變1。慢性鼻-鼻竇炎的癥狀持續(xù)時間不少于12周，并且癥狀未徹底消失。在臨床上，可將慢性

2、鼻-鼻竇炎(CRS)分為慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉(CRSwNP)和慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉(CRSsNP)，對于慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉，有學者依據(jù)鼻息肉中浸潤細胞的種類和數(shù)量，把慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉分為嗜酸性粒細胞型、中性粒細胞型、非嗜酸性粒細胞非中性粒細胞型2。不同的慢性鼻-鼻竇炎表型，其各自的內(nèi)在病理生理學特點存在差異，這種差異可能預示不同的發(fā)病機制，識別不同的發(fā)病機制可通過特定的生物標志物來完成，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)某些生物學標志物，如血液中

3、特異性IgE、金黃色葡萄球菌內(nèi)毒素IgE等，可作為慢性鼻-鼻竇炎的不同內(nèi)在型的生物標志物3，并且針對不同內(nèi)在型的標志物可以選擇個體化的治療4，5。
　　研究報道骨膜蛋白(Periostin)是嗜酸性粒細胞性哮喘患者呼吸道炎癥的全身性生物標志物6,7，參與哮喘患者呼吸道黏膜上皮下組織纖維化等結(jié)構(gòu)重塑8,9。上下呼吸道常常同時存在炎癥10，組織病理學研究發(fā)現(xiàn)與哮喘患者下呼吸道結(jié)構(gòu)重塑相一致，在慢性鼻-鼻竇炎患者鼻腔鼻竇組織中也存在結(jié)構(gòu)

4、重塑11。由此推測，在慢性鼻-鼻竇炎的組織中，可能存在骨膜蛋白的表達，這種表達在不同的慢性鼻-鼻竇炎表型可能具有差異，這種差異對于認識慢性鼻-鼻竇炎的內(nèi)在分型具有重要意義，與慢性鼻-鼻竇炎的發(fā)病機制有一定的關(guān)系。
　　在哮喘患者中，血清中升高的骨膜蛋白與一種特殊的哮喘表型嗜酸性粒細胞型哮喘有一定關(guān)系，并且經(jīng)常合并有阻塞性肺功能障礙和鼻部疾病12，在Th2型（IL-5、IL-13高表達）、伴有較高的嗜酸性粒細胞的哮喘表型中，與血中嗜

5、酸性粒細胞數(shù)、痰中嗜酸性粒細胞相比，血清中骨膜蛋白對于檢測氣流受限具有更高的敏感性13，血清中骨膜蛋白可以作為哮喘的生物標志物，主要表現(xiàn)在兩個方面:一是作為Ⅱ型免疫反應的生物標志物代替指標，二是作為反映組織重塑或纖維化的生物標志物14。已有研究發(fā)現(xiàn)在慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉中，59.6％存在嗜酸性粒細胞(EOS)浸潤，嗜酸性粒細胞浸潤在慢性鼻-鼻竇炎(CRS)的病理生理過程中處于中心位置15。在嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉中，骨膜

6、蛋白的表達可能與嗜酸性粒細胞的浸潤有一定的關(guān)系，進而可能與嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉的形成有關(guān)。
　　目的:我們的研究旨在觀察骨膜蛋白在慢性鼻-鼻竇炎不同表型的表達，分析其在慢性鼻-鼻竇炎病理生理過程中的作用，為慢性鼻-鼻竇炎的內(nèi)在分型提供可能的依據(jù)。
　　方法:選擇住院患者，分為慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組(CRSsNP、19例)、慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組(CRSwNP、36例)、鼻中隔偏曲組（DNS、15例）。分

7、別留取慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組的篩竇黏膜和慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組患者的篩竇黏膜組織與鼻息肉組織、鼻中隔偏曲患者的下鼻甲組織作為標本，對慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組標本進行HE染色，依據(jù)嗜酸性粒細胞的浸潤情況，將慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組分為嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組(ECRSwNP)和非嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組(NonECRSwNP)，對四組標本進行骨膜蛋白免疫組織化學染色(IHC)、實時定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反

8、應(RT-PCR)，觀察骨膜蛋白分子及mRNA在四組標本的表達;通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測四組患者血清中骨膜蛋白的濃度。并對局部組織中免疫組織化學染色評分、骨膜蛋白mRNA、嗜酸性粒細胞浸潤和血清中骨膜蛋白濃度、血液中嗜酸性粒細胞比例分別進行各指標間相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:骨膜蛋白免疫組化染色顯示，骨膜蛋白在四組標本中的表達主要位于鼻黏膜上皮的基底膜、上皮下的纖維組織。慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組（篩竇黏膜）、嗜酸性粒

9、細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組（篩竇黏膜、鼻息肉）、非嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組（篩竇黏膜、鼻息肉）和鼻中隔偏曲組（下鼻甲黏膜）的免疫組化染色評分分別為3.19±0.98、3.90±0.42/4.17±0.52、3.20±0.86/3.32±0.84和2.44±0.86，慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組、嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組以及非嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組評分高于鼻中隔偏曲組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜

10、0.05、P＜0.01、P＜0.01)。嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組高于其他三組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組、非嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組之間相比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。通過酶聯(lián)免疫吸附方法測得四組患者血清中的骨膜蛋白濃度，慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組、嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組、非嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組和鼻中隔偏曲組血清中骨膜蛋白濃度分別

11、為47962.77±14307.30、72138.91±21722.43、43012.45±10314.95和31337.81±8181.02pg/ml。嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組明顯高于其他三組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，鼻中隔偏曲組低于其他三組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組與非嗜酸性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組相比無明顯差異(P＞0.05)。四組患者鼻黏膜組織中均有骨膜蛋白mRNA

12、，慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組、嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組、非嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組和鼻中隔偏曲組鼻黏膜組織骨膜蛋白mRNA分別為0.351156±0.250896、0.477044±0.505552、0.326074±0.412194和0.340352±0.304540，與鼻中隔偏曲組相比，慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉組、嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組、非嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組鼻黏膜組織中

13、骨膜蛋白mRNA升高，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。在嗜酸性粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組，鼻息肉組織中骨膜蛋白分子的表達與局部組織（篩竇黏膜、鼻息肉）中嗜酸性粒細胞的浸潤具有一定相關(guān)性(P＜0.01，P＜0.05)，血清骨膜蛋白濃度與血中嗜酸性粒細胞比例具有一定的相關(guān)性(P＜0.01)。在四組標本中，局部組織中骨膜蛋白分子的表達與血中嗜酸性粒細胞比例無明顯相關(guān)性(P＞0.05)。篩竇黏膜骨膜蛋白mRNA的表達與局部組織中嗜酸性