SCF和G-CSF聯(lián)合動(dòng)員小鼠外周血培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性的初步研究.pdf

1、匪河瞎蓮科六蠆碩士研究生畢業(yè)論文s c F 和G ．C S F 聯(lián)合動(dòng)員小鼠外周血培養(yǎng)問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性的初步研究研 究 生 王東來(lái)導(dǎo) 師 馮建剛教授專 業(yè)二 級(jí) 學(xué) 院研究起止日期提 交 日 期外科學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院2 0 0 4 年9 月2 0 0 6 年3 月2 0 0 6 年3 月中文摘要對(duì)照，兩組均采用密度梯度離心結(jié)合貼壁法篩選M S C 。用含1 5 ％胎牛血清的低糖D M E M 培養(yǎng)液培養(yǎng)，4 8 小時(shí)后首次換液，去

2、除未貼壁細(xì)胞，以后3 —5 天換液一次，3 周左右傳代。取生長(zhǎng)良好的細(xì)胞進(jìn)行生長(zhǎng)曲線測(cè)定、細(xì)胞周期檢測(cè)、貼壁率檢測(cè)、克隆形成能力檢測(cè)，并應(yīng)用流式細(xì)胞分析結(jié)合免疫組化方法鑒定M S C 。同時(shí)利用含有轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子．p ( T G F ．B 1 )的高糖D M E M 培養(yǎng)液誘導(dǎo)第三代M S C 向軟骨細(xì)胞分化，應(yīng)用免疫組化的方法檢測(cè)I I 型膠原的表達(dá)情況。結(jié)果：1 對(duì)照組無(wú)一份培養(yǎng)出M S C ，試驗(yàn)組7 份成功培養(yǎng)出M S C 。原代

3、M S C 首次傳代時(shí)間為4 周左右，細(xì)胞形態(tài)趨向于多角形，傳代之后細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯增快，經(jīng)過(guò)3 —5 天的潛伏期后，出現(xiàn)5 ．7 天的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，而后進(jìn)入平臺(tái)期，約3 周左右傳代，細(xì)胞呈均勻分布的集落樣生長(zhǎng)，形態(tài)更趨向于長(zhǎng)梭形，細(xì)胞的均質(zhì)性明顯提高，傳至第五代時(shí)細(xì)胞出現(xiàn)老化。2 細(xì)胞周期檢測(cè)發(fā)現(xiàn)第三代的M S C 中S + G 2 + M 期的細(xì)胞占2 1 ．4 ％，G o ／G l 期的細(xì)胞約占7 8 ．6 ％，說(shuō)明絕大多數(shù)細(xì)胞處于

4、靜止期。貼壁率檢測(cè)發(fā)現(xiàn)2 4 小時(shí)貼壁率達(dá)到4 5 ％，4 8小時(shí)貼壁率為8 1 ．5 ％。P o 代細(xì)胞平均細(xì)胞集落形成率為l 。2 5 ／1 0 6 ，P 】、P 3 、P 5 代細(xì)胞的平均細(xì)胞集落形成率分別為2 1 ．3 2 ％，1 6 ．1 3 ％，9 ．6 3 ％。3 7 份生長(zhǎng)良好的第三代貼壁細(xì)胞行表面標(biāo)志物檢測(cè)，流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示表達(dá)相關(guān)的抗原標(biāo)記C D 2 9 和C D 4 4 ，不表達(dá)造血細(xì)胞系的表面標(biāo)志C D 3