基于斑馬魚模型評價柴胡協(xié)同索拉非尼抗肝細胞癌的功效.pdf

1、目的：肝癌是嚴(yán)重危害人類健康的全球性腫瘤，柴胡為疏肝解郁之要藥，加之作為經(jīng)典的歸肝經(jīng)藥物，臨床上被廣泛用于肝癌的治療。本研究提出柴胡具有靶向性以“修飾”抗肝癌藥物，將其運送至腫瘤部位，以提高治療效果的這一假說，選擇TG品系fli1a-EGFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚為實驗對象，以體視熒光顯微鏡為主要觀察工具，客觀、系統(tǒng)而直接地評價柴胡協(xié)同索拉非尼抗HCC的功效，進而驗證我們提出的假說的可能性，為柴胡在臨床上應(yīng)用于肝癌的治療提供客觀的實驗依據(jù)。

2、>　　方法：通過體視顯微鏡(明場)和體視熒光顯微鏡分別觀察22hpf轉(zhuǎn)基因斑馬魚模型胚胎的血管表型來評價柴胡抑制新生血管生成的作用；記錄2dpf野生型斑馬魚胚胎暴露于不同濃度梯度柴胡水提物的死亡數(shù)，擬合LC50、LC10，估算MNLC，評估柴胡水提物的急性毒性；構(gòu)建高表達熒光素酶的HepG2穩(wěn)轉(zhuǎn)株，通過裸鼠驗證其成瘤性，通過顯微注射將CM-Dil試劑染色的穩(wěn)轉(zhuǎn)株注射入2dpf的轉(zhuǎn)基因斑馬魚胚胎的卵黃囊內(nèi)，立即評估人肝癌轉(zhuǎn)基因斑馬魚卵黃囊

3、移植瘤模型是否成功建立；通過體視顯微鏡和體視熒光顯微鏡觀察，定量分析并評價柴胡協(xié)同索拉非尼抑制轉(zhuǎn)基因斑馬魚HCC移植瘤生長的功效。
　　結(jié)果:柴胡對轉(zhuǎn)基因斑馬魚新生血管的生成無抑制作用；柴胡水提物致野生型斑馬魚胚胎的死亡率呈明顯的濃度依賴關(guān)系，柴胡水提物對斑馬魚胚胎72h-LC50為670μg/ml、72h-LC10為205μg/ml、72h-MNLC為155μg/ml，柴胡水提物對斑馬魚胚胎及幼魚的急性毒性較輕；確定了人肝癌轉(zhuǎn)基