羊腎中氨基酰化酶的提取及應用.pdf

1、在傳統(tǒng)的20種天然氨基酸中，對于L型和D型都有利用價值的氨基酸，化學合成結合手性拆分的方法，具有低成本、適于大規(guī)模生產等優(yōu)點。而高效、綠色、安全的氨基?；阜ú鸱?，是拆分氨基酸的最佳方法之一。氨基?；笍V泛地存在于動物、植物、微生物中，它能夠水解N-?；?L或D-氨基酸的酰胺鍵，生成L或D-氨基酸，目前主要應用于工業(yè)化L-或D-氨基酸的生產。本文采用硫酸銨鹽析，丙酮分級沉淀的方法，從新鮮羊腎中提取氨基?；?。拆分在堿性條件下用乙酸酐作為

2、乙?；噭┖铣傻腘-乙酰-L-蘇氨酸。并且以殼聚糖為載體，戊二醛為交聯劑，固定氨基?；福瑢Π被；傅墓潭ɑ瘲l件、固定化酶的性質進行了研究。為氨基酸生產，尤其是蘇氨酸的酶法生產提供理論依據。 試驗結果表明：通過飽和度為0.45的硫酸銨鹽析，丙酮分級沉淀(收集40-60﹪(v/v)的部分)，該酶的比活為226U/mg，純化倍數為18.8，回收率為52﹪，Km值為4.228×10<'-2>mol/L，最適pH為7.5-8.0，最適

3、反應溫度隨著作用時間的延長而降低。N-乙酰-L-蘇氨酸合成較適宜的合成工藝條件為：蘇氨酸與乙酸酐最佳的摩爾比為1∶1.0～1∶1.05，反應的pH值為7～9，反應溫度為10-20℃，反應最佳時間通常為產生渾濁后一個小時之內。游離氨基?；覆鸱痔K氨酸的優(yōu)化條件：反應溫度為37℃，pH為7.0，初始底物濃度為0.2mol/L，L-蘇氨酸收率為70.9﹪。拆分蛋氨酸的優(yōu)化條件：反應溫度為37℃，pH為7.5，初始底物濃度為0.3mol/L，L

4、-蘇氨酸收率為74.3﹪。 在pH值為6.0，溫度30℃的條件下，0.1g殼聚糖微球與5ml1﹪戊二醛的交聯后，固定0.8mg氨基?；感Ч罴?。固定化酶的最適溫度和pH分別為50℃和7.0，而游離酶的最適溫度為40℃，最適pH為7.5，固定化酶在50-70℃范圍內都保持了較高的酶活力，熱穩(wěn)定性遠遠高于游離酶，固定化酶的K<,M>值為11.796×10<'-2>mol/L，較游離酶有所升高，該固定化酶具有良好的操作及保存穩(wěn)定性。