Dicer1功能缺失通過下調(diào)let-7增強子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞干性.pdf

1、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院八年制博士學(xué)位論文1DicerDicer1功能功能缺失通過缺失通過下調(diào)下調(diào)letlet7增強增強子宮內(nèi)膜癌子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞干性細(xì)胞干性摘要摘要目的：目的：子宮內(nèi)膜癌是一種常見的婦科惡性腫瘤目前對于子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的分子機制研究仍尚未明確。Dicer1是核糖核酸內(nèi)切酶III（ribonuclease，RNaseIII）家族成員之一，是miRNA合成過程中的一種關(guān)鍵酶。研究表明Dicer與常見婦科腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)歸密切相

2、關(guān)，Dicer基因低表達(dá)腫瘤更常表現(xiàn)出惡性程度高和預(yù)后差的特點。本文旨在研究Dicer1在內(nèi)膜癌中的表達(dá)模式及作用機制。方法：方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法檢測正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜癌組織中Dicer1的表達(dá)情況，并應(yīng)用免疫組化評分分析Dicer1的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。體外實驗分別采Dicer1沉默過表達(dá)質(zhì)粒及對應(yīng)的陰性對照轉(zhuǎn)染內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa，An3ca，應(yīng)用CCK8、Transwell小室等功能學(xué)實驗研究Dice

3、r1對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株增殖、遷移、侵襲能力的影響，并且通過PCRWesternblot、細(xì)胞免疫熒光等技術(shù)探索Dicer1對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞干性標(biāo)志物表達(dá)水平的影響。體內(nèi)實驗我們通過質(zhì)粒構(gòu)建Dicer1穩(wěn)定沉默內(nèi)膜癌細(xì)胞株探討Dicer1對裸鼠皮下成瘤能力的影響。機制研究部分應(yīng)用let7b模擬物及對照組與Dicer1沉默質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染Ishikawa細(xì)胞，觀察let7家族及其下游靶基因在Dicer1與內(nèi)膜癌干性調(diào)控通路中的作用。結(jié)果結(jié)果：免疫

4、組化結(jié)果顯示Dicer1在內(nèi)膜癌中的表達(dá)明顯低于正常內(nèi)膜組織，并與腫瘤細(xì)胞的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。Dicer1功能缺失在體外可促進(jìn)內(nèi)膜癌的增殖，遷移和侵襲能力，并增強干細(xì)胞標(biāo)志物CD44、Aldh1等的表達(dá)。同時，let7家族及下游靶基因HMGA2，HRAS參與了這種調(diào)控。上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院八年制博士學(xué)位論文3目錄摘要................................................................

5、................................................................1目錄................................................................................................................................3縮略詞表....................

6、....................................................................................................5緒論.....................................................................................................................

7、...........61Dicer1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá).........................................................................91.1引言..............................................................................................................

8、...91.2材料與方法.....................................................................................................91.3實驗結(jié)果...................................................................................................

9、....141.4討論...............................................................................................................162Dicer1參與調(diào)控子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞干性...................................................................172.1引言..

10、.............................................................................................................172.2材料與方法...................................................................................................17

11、2.3實驗結(jié)果.......................................................................................................322.4討論.......................................................................................................

12、........393let7參與Dicer1對內(nèi)膜癌細(xì)胞干性的調(diào)節(jié)..........................................................413.1引言...............................................................................................................413.2材料與方法

13、...................................................................................................423.3實驗結(jié)果.......................................................................................................493.4討論..

14、.............................................................................................................54總結(jié)...........................................................................................................