感染后腸易激綜合征小鼠模型中腸道免疫及粘膜屏障功能的改變.pdf

1、本文對(duì)感染后腸易激綜合征小鼠模型中腸道免疫及粘膜屏障功能的改變進(jìn)行了研究。本研究分為三個(gè)部分：
　　第一部分：感染后腸易激綜合征小鼠模型的建立。
　　目的：觀察NIH小鼠感染旋毛蟲(chóng)2周，8周后腸道組織病理改變及內(nèi)臟敏感性的改變，建立一個(gè)可以真實(shí)模擬人體腸易激綜合征特征的動(dòng)物模型。
　　方法：6-8周齡雄性NIH小鼠給予350-400只旋毛蟲(chóng)灌胃，感染2周，8周后用HE染色的方法評(píng)估近端結(jié)腸，遠(yuǎn)端結(jié)腸，空腸，回腸組織病理

2、情況，并對(duì)炎癥程度進(jìn)行評(píng)分；采用腹壁回撤反應(yīng)（AWR）評(píng)分判斷小鼠對(duì)結(jié)直腸擴(kuò)張（CRD）的內(nèi)臟敏感性。
　　結(jié)果： NIH小鼠在感染旋毛蟲(chóng)2周后，HE染色顯示腸道組織明顯充血水腫，固有層及粘膜層出現(xiàn)大量的中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，粘膜層破壞嚴(yán)重，并伴有中重度間質(zhì)性水腫，呈明顯炎癥性改變，炎癥評(píng)分明顯高于正常對(duì)照組小鼠（P＜0.05）；而感染8周后的NIH小鼠腸道組織HE染色則未顯示明顯損傷及炎癥浸潤(rùn)，組織學(xué)評(píng)分也與正常組織無(wú)明

3、顯差異（P＞0.05）。在直腸擴(kuò)張壓力為40mmHg，60mmHg時(shí)，感染后2周模型組小鼠AWR評(píng)分顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.05）；感染后8周模型組小鼠AWR評(píng)分低于2周模型組小鼠（P＜0.05），但高于正常對(duì)照組小鼠（P＜0.05）。2周，8周模型組小鼠的疼痛閾值均小于正常組（P＜0.05），且2周模型鼠疼痛閾值小于8周組（P＜0.05）。
　　結(jié)論： NIH小鼠在感染旋毛蟲(chóng)8周后腸道炎癥消退，內(nèi)臟高敏感性持續(xù)存在，是一個(gè)良

4、好的伴有內(nèi)臟高敏感的感染后腸易激綜合征動(dòng)物模型。
　　第二部分：感染旋毛蟲(chóng)小鼠腸道炎癥因子和屏障功能的改變。
　　目的：研究旋毛蟲(chóng)感染NIH小鼠后不同時(shí)期腸道炎癥因子TNF-α，IL-12，IL-6， IL-4，IL-10，IL-17表達(dá)的變化及腸道通透性的變化。
　　方法：給予6-8周齡雄性NIH小鼠旋毛蟲(chóng)灌胃，感染2周，8周后用HE染色的方法評(píng)估近端結(jié)腸，遠(yuǎn)端結(jié)腸，空腸，回腸組織病理情況，并對(duì)炎癥程度進(jìn)行評(píng)分；采用

5、Western-blot檢測(cè)各組小鼠回腸炎癥因子TNF-α，IL-12，IL-6，IL-4，IL-10，IL-17及緊密連接蛋白Occludin-1和Claudin-1的含量，對(duì)比各組間含量的差異；采用Ussing Chamber檢測(cè)各組小鼠回腸絨毛上皮（VE）和濾泡相關(guān)上皮（FAE）跨膜電阻值（TER）和異硫氰酸熒光素標(biāo)記的大分子右旋糖苷（FD440KD）通過(guò)率的改變。
　　結(jié)果： NIH小鼠在感染旋毛蟲(chóng)2周后，HE染色顯示腸道

6、組織明顯充血水腫，固有層及粘膜層出現(xiàn)大量的中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，粘膜層破壞嚴(yán)重，并伴有中重度間質(zhì)性水腫，呈明顯炎癥性改變，炎癥評(píng)分明顯高于正常對(duì)照組小鼠（P＜0.05）；而感染8周的NIH小鼠腸道組織HE染色則未顯示明顯炎癥浸潤(rùn)，組織學(xué)評(píng)分也與正常組織無(wú)明顯差異（P＞0.05）。感染8周組小鼠IL-12的表達(dá)量明顯高于正常對(duì)照組（P＜0.05），而感染2周組小鼠IL-12的表達(dá)量與正常對(duì)照組無(wú)明顯差異（P＞0.05）；2周，8周

7、模型組小鼠IL-4表達(dá)量高于正常組，IL-10含量低于正常組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而TNF-α，IL-6， IL-17的表達(dá)量與正常組相比無(wú)明顯變化。2周模型組小鼠緊密連接蛋白 Occludin-1和Claudin-1的表達(dá)明顯低于正常組和8周模型組（P＜0.05），而8周模型組中兩者含量低于正常組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。2周，8周模型組VE的TER和FD4通過(guò)率明顯低于正常對(duì)照組（P＜0.05）；而FVE的TER

8、和FD4通過(guò)率與正常對(duì)照組相比無(wú)明顯改變（P＞0.05）。
　　結(jié)論：研究結(jié)果提示在旋毛蟲(chóng)感染后的不同時(shí)期，小鼠腸道組織炎癥表現(xiàn)及免疫調(diào)節(jié)機(jī)制并不相同，回腸均存在屏障功能的異常及通透性的增加，且主要存在于絨毛上皮，但不同時(shí)期引起回腸通透性增加的機(jī)制可能不同。
　　第三部分：PI-IBS小鼠固有層樹(shù)突狀細(xì)胞介導(dǎo)粘膜屏障異常和內(nèi)臟高敏。
　　目的：在感染后腸易激綜合征（PI-IBS）的發(fā)展過(guò)程中，輕度炎癥越來(lái)越引起人們的注

9、意。固有層樹(shù)突狀細(xì)胞（LPDCs）作為一種抗原提呈細(xì)胞，在免疫激活中起了非常重要的作用。本研究旨在驗(yàn)證LPDCs可能有利于PI-IBS小鼠模型中腸道通透性的增加及內(nèi)臟高敏感的形成。
　　方法：通過(guò)給予旋毛蟲(chóng)建立 PI-IBS小鼠模型。腹壁回撤反射（AWR）用于評(píng)估內(nèi)臟敏感性。通過(guò)常規(guī)HE染色進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分及腸道細(xì)胞因子表達(dá)量的檢測(cè)來(lái)評(píng)估腸道炎癥。采用Ussing Chamber測(cè)量跨上皮電阻和FD4通透性。Western blot

10、ting檢測(cè)小鼠腸道組織緊密連接蛋白的表達(dá)量來(lái)評(píng)估腸道通透性。透射電鏡技術(shù)觀察小鼠腸道上皮細(xì)胞間緊密連接蛋白的結(jié)構(gòu)。處死小鼠后，消化腸道組織，并采用磁珠細(xì)胞分選術(shù)分離純化 LPDCs，然后將從PI-IBS小鼠模型中及正常對(duì)照組小鼠腸道中提取的1×106 LPDCs通過(guò)尾靜脈注射過(guò)繼給相應(yīng)的正常小鼠。在過(guò)繼LPDCs120h后，根據(jù)上述方法對(duì)小鼠進(jìn)行AWR評(píng)分，腸道炎癥和通透性進(jìn)行評(píng)估。
　　結(jié)果：小鼠在旋毛蟲(chóng)感染的急性期及慢性期均

11、表現(xiàn)出腸道炎癥的出現(xiàn)，粘膜通透性的增加及內(nèi)臟高敏感性的形成。過(guò)繼了PI-IBS小鼠模型LPDCs的小鼠出現(xiàn)了輕度的炎癥----小鼠回腸組織中細(xì)胞因子 IL-4的表達(dá)量明顯增加。同時(shí)，過(guò)繼了PI-IBS小鼠LPDCs的小鼠回腸TER明顯降低，且出現(xiàn)超微結(jié)構(gòu)的改變，粘膜通透性增加。更有意思的是，接受了PI-IBS小鼠LPDCs的小鼠AWR評(píng)分明顯升高而疼痛閾值明顯降低。
　　結(jié)論： PI-IBS小鼠模型中的LPDCs不僅能夠?qū)⒛c道炎癥