利拉魯肽對(duì)人惡性腫瘤細(xì)胞增殖遷移凋亡影響的研究.pdf

1、隨著環(huán)境和生活方式的改變，糖尿病和惡性腫瘤已經(jīng)成為我國乃至全球的重要死亡原因。流行病學(xué)資料顯示糖尿病患者并發(fā)惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加，糖尿病合并惡性腫瘤患者的降糖藥物需要長期甚至終生使用，因此降糖藥物是否會(huì)影響惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后也就備受關(guān)注。2型糖尿病患者常用的降糖藥物包括胰島素、二甲雙胍、胰高血糖素樣肽-1受體( glucagon-like peptide-1 Receptor，GLP-1R)激動(dòng)劑等。部分研究顯示胰島素可能會(huì)促進(jìn)

2、惡性腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展，二甲雙胍可以抑制食管癌、胃癌、胰腺癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。GLP-1R激動(dòng)劑是一種新型降糖藥物，其良好的降血糖作用，且使用方便，因此受到越來越多糖尿病患者的青睞。GLP-1與GLP-1R結(jié)合后能夠通過作用于PI(3)K、Wnt等信號(hào)通路從而影響細(xì)胞的增殖、凋亡，因此其可能會(huì)影響惡性腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展。目前關(guān)于 GLP-1R激動(dòng)劑的臨床研究主要是集中于短效GLP-1R激動(dòng)劑艾塞那肽與腫瘤之間關(guān)系的研究，現(xiàn)有的臨

3、床研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)艾塞那肽能夠抑制多種惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移，但對(duì)于長效GLP-1R激動(dòng)劑利拉魯肽研究還不多，此外既往關(guān)于 GLP-1R激動(dòng)劑的臨床研究主要是集中在關(guān)于GLP-1R激動(dòng)劑與胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌等腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為之間的研究，而關(guān)于其對(duì)結(jié)腸癌、胃癌、肺癌等惡性腫瘤的影響的臨床研究目前還不多。因此本研究擬通過將長效GLP-1R激動(dòng)劑利拉魯肽作用于人結(jié)腸癌、胃癌、肺癌細(xì)胞系，觀察其對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、遷移、凋亡等生物學(xué)行為的影響

4、，為合并結(jié)腸癌、胃癌或者肺癌的2型糖尿病患者是否能夠安全使用GLP-1R激動(dòng)劑利拉魯肽提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　目的:
　　探討新型降糖藥物 GLP-1R激動(dòng)劑利拉魯肽對(duì)人結(jié)腸癌 HCT116、SW480細(xì)胞、人胃癌BGC823、SGC7901細(xì)胞、人肺癌H1299細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，為合并2型糖尿病的腫瘤患者使用GLP-1受體激動(dòng)劑是否安全提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.將利拉魯肽作用于HCT116、SW480

5、人結(jié)腸癌細(xì)胞系、BGC823、SGC7901人胃癌細(xì)胞系、H1299人肺癌細(xì)胞，觀察利拉魯肽對(duì)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，分別用CCK-8法檢測(cè)利拉魯肽對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖能力的影響；細(xì)胞平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)利拉魯肽對(duì)腫瘤細(xì)胞克隆形成能力的影響；劃痕法檢測(cè)利拉魯肽對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移能力的影響；流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)利拉魯肽對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的影響。
　　2.Q-PCR技術(shù)檢測(cè)HCT116、SW480人結(jié)腸癌細(xì)胞系、BGC823、SGC7901人胃癌細(xì)胞系

6、、H1299人肺癌細(xì)胞GLP-1R mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1. GLP-1R激動(dòng)劑利拉魯肽作用于人結(jié)腸癌HCT116、SW480細(xì)胞24h、48h、72h、96h后，10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L藥物組HCT116細(xì)胞、SW480細(xì)胞在不同作用時(shí)間及作用濃度時(shí)的細(xì)胞增殖率與對(duì)照組相比無明顯變化（P＞0.05）；利拉魯肽作用于人結(jié)腸癌HCT116、SW480細(xì)胞48h后，與對(duì)照組相比

7、，1000nmol/L藥物組 HCT116細(xì)胞和 SW480細(xì)胞的細(xì)胞克隆形成率分別為96.33％、98.01%（P＞0.05），與對(duì)照組相比，克隆形成數(shù)目和大小無明顯差異；HCT116細(xì)胞對(duì)照組、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L藥物組腫瘤細(xì)胞遷移距離分別為37.70±1.70μm、34.64±2.17μm、37.82±1.78μm、36.61±2.14μm， SW480細(xì)胞對(duì)照組、10nmol/L、100nm

8、ol/L、1000nmol/L藥物組腫瘤細(xì)胞遷移距離分別為26.47±2.24μm、26.90±1.88μm、23.21±0.61μm、25.08±2.17μm（與對(duì)照組相比，P＞0.05）；HCT116細(xì)胞對(duì)照組、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L利拉魯肽藥物組的腫瘤細(xì)胞凋亡率分別為3.03%、2.83%、3.57%、3.60%，SW480細(xì)胞對(duì)照組、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L利

9、拉魯肽藥物組的腫瘤細(xì)胞凋亡率分別為3.00%、3.40%、4.23%、4.17%（與對(duì)照組相比，P＞0.05）。
　　2.GLP-1R體激動(dòng)劑利拉魯肽作用于人胃癌BGC823、SGC7901細(xì)胞24h、48h、72h、96h后，10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L藥物組BGC823、SGC7901細(xì)胞在不同作用時(shí)間及作用濃度時(shí)的細(xì)胞增殖率與對(duì)照組相比無明顯變化（P＞0.05）；利拉魯肽作用于人胃癌BGC823

10、、SGC7901細(xì)胞48h后，與對(duì)照組相比，1000nmol/L藥物組BGC823細(xì)胞和SGC7901細(xì)胞的細(xì)胞克隆形成率為97.33%、103.01%（P＞0.05），與對(duì)照組相比，克隆形成數(shù)目和大小無明顯差異；BGC823細(xì)胞對(duì)照組、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L藥物組腫瘤細(xì)胞遷移距離分別為23.73±1.47μm，21.24±0.80μm、22.27±1.27μm、20.52±0.55μm，SGC790

11、1細(xì)胞對(duì)照組、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L藥物組腫瘤細(xì)胞遷移距離分別為31.08±1.95μm，31.27±1.75μm、30.52±2.48μm、28.14±1.13μm（與對(duì)照組相比，P＞0.05）；BGC823細(xì)胞對(duì)照組、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L利拉魯肽藥物組的腫瘤細(xì)胞凋亡率分別為2.20%、2.03%、2.30%、2.07%，SGC7901細(xì)胞對(duì)照組、10nmol/

12、L、100nmol/L、1000nmol/L利拉魯肽藥物組的腫瘤細(xì)胞凋亡率分別為5.63%、5.73%、5.87%、5.50%（與對(duì)照組相比，P＞0.05）。
　　3. GLP-1受體激動(dòng)劑利拉魯肽作用于人肺癌H1299細(xì)胞24h、48h、72h、96h后，與對(duì)照組相比，10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L藥物組腫瘤細(xì)胞在不同作用時(shí)間及作用濃度時(shí)的細(xì)胞增殖率與對(duì)照組相比無明顯變化（P＞0.05）；利拉魯肽作用

13、于人肺癌H1299細(xì)胞48h后，與對(duì)照組相比，1000nmol/L藥物組腫瘤細(xì)胞細(xì)胞克隆形成率為101.33%（P＞0.05），與對(duì)照組相比，克隆形成數(shù)目和大小無明顯差異；對(duì)照組、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L藥物組腫瘤細(xì)胞遷移距離分別為23.27±1.51μm，25.07±1.91μm、23.74±1.47μm、25.48±2.91μm（與對(duì)照組相比，P＞0.05）；對(duì)照組、10nmol/L、100nmol

14、/L、1000nmol/L利拉魯肽藥物組的腫瘤細(xì)胞凋亡率分別為2.00%、2.37%、2.17%、1.90%（與對(duì)照組相比，P＞0.05）。
　　4.Q-PCR技術(shù)檢查結(jié)果顯示HCT116、SW480人結(jié)腸癌細(xì)胞系、BGC823、SGC7901人胃癌細(xì)胞系、H1299人肺癌細(xì)胞中均無GLP-1R mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　在人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116、SW480、人胃癌細(xì)胞BGC823、SGC7901以及人肺癌H