腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對壓力性尿失禁大鼠模型控尿功能的影響.pdf

1、一、研究背景：
　　壓力性尿失禁（Stress Urinary Incontinence，SUI）是一種困擾著中老年女性的多發(fā)病，其特點為在腹壓突然增加時發(fā)生尿液經(jīng)尿道外口不自主地漏出。目前，陰道分娩被認為是SUI最重要的病理生理學機制之一。臨床隨訪及動物模型研究發(fā)現(xiàn)，陰道分娩過程中胎兒會對盆底肌肉、神經(jīng)及結締組織造成不同程度的損傷，并影響著產(chǎn)后SUI的發(fā)生。
　　長期臨床隨訪研究表明，在產(chǎn)后5-7年出現(xiàn)SUI的女性中，陰部

2、神經(jīng)動作電位潛伏期明顯延長，這意味著尿道外括約?。‥xternal Urethral Sphincter，EUS）的神經(jīng)支配仍處于不完全恢復狀態(tài)。這一結果也進一步得到了我們的前期研究的證實，即當雙重損傷SUI大鼠模型的EUS功能和尿道阻力已經(jīng)恢復至正常范圍時，形態(tài)學研究仍可觀察到EUS的神經(jīng)支配處于異常狀態(tài)。上述結果均強調(diào)出了陰道分娩過程中與控尿相關神經(jīng)損傷的重要性，這也提示恢復這些神經(jīng)的功能可能將成為臨床治療的核心內(nèi)容。
　　在

3、促進神經(jīng)的生長、存活及損傷后的再生修復過程中，腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-derived Neruotrophic Factor，BDNF)發(fā)揮著關鍵性的作用。此外，它還是一種參與下尿路神經(jīng)調(diào)控的重要神經(jīng)調(diào)制，它與多種下尿路功能障礙性疾病的病理生理學過程相關，包括:膀胱過度活動癥、SUI、間質性膀胱炎/膀胱疼痛綜合征及神經(jīng)源性膀胱等。不僅如此，動物模型研究也表明陰部神經(jīng)的損傷后修復需要BDNF的參與。因此，在本研究中我們選擇了BDN

4、F為切入點探索它對SUI大鼠模型控尿功能的影響。
　　二、研究目的：
　　本研究旨為探索BDNF對雙重損傷SUI大鼠模型控尿功能的影響。其結果將進一步解釋神經(jīng)源性異常在臨床SUI發(fā)生機制中的重要地位，并為開發(fā)新的臨床治療方法提供理論依據(jù)，同時也將為預防SUI的發(fā)生提供一種全新的思路。本研究包括以下3部分:
　　第一部分:研究局部應用外源性BDNF對SUI大鼠模型的陰部神經(jīng)進行局部治療對其控尿功能及神經(jīng)恢復的影響。

5、>　　第二部分:探索短期單次陰部神經(jīng)運動支電刺激對大鼠陰部神經(jīng)核團BDNF表達及其下尿路功能的影響。
　　第三部分:探索長時程周期性陰部神經(jīng)電刺激對BDNF表達及SUI大鼠模型控尿功能及神經(jīng)恢復的影響。
　　三、研究設計
　　第一部分:將93只雌性、年齡相近的SD大鼠隨機分為以下3組: SUI模型+BDNF治療組、SUI模型+生理鹽水治療組、假損傷模型+生理鹽水治療組。SUI模型的建立包括雙側陰部神經(jīng)損傷(Pudend

6、al Nerve Crush，PNC)和持續(xù)4小時的陰道擴張(Vaginal Distension，VD)。BDNF和生理鹽水的給予采用的是植入式mini-osmotic泵對雙側損傷的神經(jīng)進行歷時2周或3周的局部治療。假損傷組除不進行PNC和VD外，其余操作均與模型組相同。對上述的一部分大鼠將進行漏尿點壓(Leak Point Pressure，LPP)與EUS肌電圖（Electromyography，EMG）的同步測定，完畢后收取EU

7、S組織進行神經(jīng)肌肉接頭的熒光染色形態(tài)學分析;另一部分動物將分別于4天、8天和12天時通過定量PCR和免疫熒光的手段檢測BDNF和βⅡ微管蛋白的表達。組間差異分析將采用雙因素的方差分析合并Holm-Sidak事后多重比較，P＜0.05定義為有統(tǒng)計學差異。
　　第二部分:將46只雌性成年大鼠隨機分為2組:雙重損傷SUI大鼠模型組(n=23)和對照損傷假手術組(n=23)，并即刻予以為期1小時的單側陰部神經(jīng)運動支電刺激（左側神經(jīng)電刺激，

8、右側無電刺激）。完畢后，對一部分大鼠予以膀胱和肛門外括約肌的功能學測定;另一部分大鼠在接受電刺激治療后，于2天和1周時，進行雙側陰部神經(jīng)核團內(nèi)BDNF和βⅡ微管蛋白的定量檢測。組間統(tǒng)計學分析采用的是兩因素的方差分析合并Student-Newman-Keuls事后多重比較。對于BDNF和βⅡ微管蛋白的定量數(shù)據(jù)相對量的比較采用的是單樣本t檢驗，P＜0.05表明有統(tǒng)計學差異。
　　第三部分:將60只年齡、體重相仿的雌性SD大鼠隨機分為兩

9、組:SUI模型組（n=34只）和對照損傷假手術組（n=26只），模型建立后立即予以雙側陰部神經(jīng)電極植入。隨后，將其中一部分大鼠隨機分為3組:SUI+雙側電刺激組、SUI+無電刺激組、假損傷+無電刺激組。兩周后，對各組的大鼠進行膀胱功能與控尿功能的檢測。另一部分大鼠在雙側電極植入后即刻開始對左側陰部神經(jīng)進行歷時1小時的單側電刺激，而右側不予以電刺激作為對照，在2天、1周和2周時，用定量PCR法檢分析陰部神經(jīng)核團內(nèi)BDNF和βⅡ微管蛋白的基

10、因表達量。對左右側Onuf's核團內(nèi)BDNF與βⅡ微管蛋白mRNA表達的比較采用的是單樣本的t檢驗。對雙側陰部神經(jīng)電刺激后的膀胱及控尿功能檢測指標的組間比較采用的是雙因素的方差分析合并Student-Newman-Keuls事后多重比較的方法，P＜0.05代表有統(tǒng)計學差異。
　　四、研究結果：
　　第一部分:局部予以BDNF治療不但可有助于大鼠控尿功能的早期恢復，還可改善EUS和神經(jīng)肌肉接頭的組織學形態(tài)。不僅如此，BDNF局

11、部治療可提高陰部神經(jīng)核團內(nèi)BDNF與βⅡ微管蛋白mRNA的表達量。
　　第二部分:短期單次陰部神經(jīng)運動支電刺激可顯著改善模型鼠的膀胱和肛門外括約肌功能，在給予電刺激的左側陰部神經(jīng)核團內(nèi)BDNF與βⅡ微管蛋白mRNA的表達均較右側有顯著的提高。
　　第三部分:長時程周期性陰部神經(jīng)電刺激可顯著提升Onuf's核團內(nèi)BDNF與βⅡ微管蛋白mRNA的表達量，并有助于模型鼠控尿功能的早期恢復。此外，雙側陰部神經(jīng)電刺激還有助于改善大鼠的