小鼠下丘腦、垂體、外周內(nèi)分泌腺中催乳素釋放肽及其受體mRNA表達(dá)規(guī)律的研究.pdf

1、為探討妊娠、泌乳期小鼠下丘腦、垂體、外周內(nèi)分泌腺中催乳素釋放肽(PrRP)及其受體(PrRP-R)mRNA的表達(dá)規(guī)律，首先取小鼠下丘腦，提取RNA，進(jìn)行RT-PCR。PCR產(chǎn)物與pMD-19T連接后轉(zhuǎn)化E. coli DH5α，檢測(cè)陽(yáng)性克隆并測(cè)序，克隆出小鼠PrRP基因。利用DNAstar軟件對(duì)小鼠PrRP基因進(jìn)行序列分析，并和大鼠、人、牛、綿羊PrRP核苷酸、氨基酸序列進(jìn)行比較。然后選用36只雌性小鼠，隨機(jī)分為6組(n=6)。分別在妊

2、娠6，12，18d和泌乳6，12，18d處死小鼠，取下丘腦、垂體、甲狀腺、腎上腺、卵巢組織，提取RNA。以GAPDH作為參照，利用半定量RT-PCR方法測(cè)定PrRP、PrRP-R mRNA在下丘腦、垂體、外周內(nèi)分泌腺中相對(duì)表達(dá)水平。同時(shí)采取血樣，制得血漿，通過放射免疫法(RIA)測(cè)定血漿孕酮(P)、雌二醇(E2)和催乳素(PRL)水平。運(yùn)用SPSS13.0軟件對(duì)組織PrRP、PrRP-RmRNA水平和血漿P、E2、PRL水平進(jìn)行雙側(cè)相關(guān)

3、分析，探究下丘腦、垂體、外周內(nèi)分泌腺PrRP、PrRP-R mRNA與血漿P、E2、PRL的相關(guān)關(guān)系。
　　 基因克隆結(jié)果表明，小鼠PrRP基因閱讀框(ORF)全長(zhǎng)276bp，編碼92個(gè)氨基酸。核苷酸同源性分析表明小鼠PrRP與大鼠、綿羊、牛、人PrRP核苷酸同源性分別為88.5％、74.8％、73.3％、78.2％。氨基酸同源性分析表明小鼠PrRP與大鼠、綿羊、牛、人PrRP氨基酸序列同源性分別為87.1％、71.6％、70.

4、5％、71.6％。小鼠PrRP-31與大鼠、綿羊、牛、人PrRP-31氨基酸序列同源性分別為100.0％、93.8％、93.8％、84.4％;PrRP-20氨基酸同源性分別為100.0％、95.0％、95.0％、90.0％。幾種種屬PrRP氨基酸的核心序列同為RGIRPVGRFGRRRA(45-58)，此段氨基酸序列為哺乳類PrRP的保守序列和特征序列，可進(jìn)一步修飾為RF肽。
　　 PrRP mRNA表達(dá)規(guī)律研究表明：妊娠、泌乳

5、期下丘腦、垂體、甲狀腺、腎上腺、卵巢中都有PrRP mRNA的表達(dá)。其中表達(dá)水平最高的組織為卵巢，其次為下丘腦。妊娠期甲狀腺、卵巢PrRP mRNA表達(dá)水平和下丘腦表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)關(guān)系，腎上腺PrRP mRNA表達(dá)水平和垂體表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)關(guān)系，提示下丘腦PrRP可能通過影響甲狀腺、卵巢PrRP，而垂體PrRP通過影響腎上腺PrRP參與妊娠的調(diào)控。泌乳期PrRP mRNA表達(dá)方面，甲狀腺、腎上腺、卵巢和垂體，垂體和下丘腦都呈正相

6、關(guān)關(guān)系，結(jié)果提示泌乳期機(jī)體可能通過下丘腦、垂體正向調(diào)控甲狀腺、腎上腺、卵巢PrRP mRNA的表達(dá)，參與機(jī)體泌乳的相關(guān)調(diào)控。妊娠、泌乳期下丘腦、垂體、外周內(nèi)分泌腺中PrRP mRNA表達(dá)水平的變化提示PrRP可能通過下丘腦、垂體、外周內(nèi)分泌腺參與妊娠、泌乳的調(diào)控。
　　 PrRP-R mRNA表達(dá)規(guī)律研究發(fā)現(xiàn)：妊娠、泌乳期PrRP-R mRNA在下丘腦、垂體、甲狀腺、腎上腺、卵巢中都有表達(dá)。其中妊娠期甲狀腺、下丘腦表達(dá)水平顯著著

7、高于垂體表達(dá)水平。妊娠期下丘腦PrRP-R與垂體PrRP顯著正相關(guān)，與卵巢PrRP顯著負(fù)相關(guān)，提示垂體PrRP可通過作用下丘腦調(diào)節(jié)相關(guān)生理活動(dòng)，而卵巢PrRP可能通過作用于非下丘腦器官參與機(jī)體調(diào)節(jié)。泌乳期下丘腦PrRP-R與甲狀腺PrRP顯著正相關(guān)，而甲狀腺PrRP-R與下丘腦PrRP顯著負(fù)相關(guān)，提示在甲狀腺PrRP可反饋?zhàn)饔糜谙虑鹉X，而下丘腦PrRP可能通過作用于垂體，而不是直接作用于甲狀腺進(jìn)行作用；垂體PrRP-R與卵巢PrRP顯著

8、正相關(guān)，提示泌乳期卵巢PrRP可能通過作用于垂體調(diào)節(jié)相關(guān)泌乳活動(dòng)。
　　 血漿激素分析結(jié)果表明：妊娠期小鼠血漿P水平與垂體PrRP mRNA表達(dá)量顯著負(fù)相關(guān)，提示妊娠期血漿高水平的P可能通過抑制垂體PrRP的表達(dá)，進(jìn)而影響下丘腦，調(diào)節(jié)相關(guān)妊娠活動(dòng)。泌乳期小鼠血漿E2水平與卵巢PrRP mRNA表達(dá)量之間顯著負(fù)相關(guān)，提示卵巢PrRP可能直接抑制卵巢的分泌活動(dòng)，或者通過作用于垂體間接調(diào)節(jié)卵巢分泌活動(dòng)，進(jìn)而影響泌乳相關(guān)生理活動(dòng)。妊娠、