中藥QHF復(fù)方抗肝癌轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討中藥QHF復(fù)方抗人高轉(zhuǎn)移肝癌HCCLM3細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制，評(píng)價(jià)該復(fù)方對(duì)裸鼠腋下移植瘤生長和肺轉(zhuǎn)移的療效。
　　方法：1、體外實(shí)驗(yàn)：（1）選取人高轉(zhuǎn)移肝癌HCCLM3細(xì)胞，以不同濃度的QHF復(fù)方干預(yù)HCCLM3細(xì)胞，MTT法觀察QHF對(duì)HCCLM3細(xì)胞的抑制增殖作用；（2）細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察QHF對(duì)HCCLM3細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力的影響；（3）Transwell實(shí)驗(yàn)觀察QHF對(duì)HCCLM3細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響；（4）Wester

2、n-blot檢測QHF對(duì)HGF/c-Met信號(hào)通路的影響。2、體內(nèi)試驗(yàn)：（1）選用人高轉(zhuǎn)移肝癌HCCLM3細(xì)胞，建立裸鼠腋下肝癌移植瘤模型，將48只荷瘤裸鼠隨機(jī)分為模型組（生理鹽水）、QHF低劑量組（QHF1）、QHF高劑量組（QHF2）、C-met抑制劑組（PHA665752）；（2）以抑瘤率為指標(biāo)，衡量各組藥物對(duì)腋下移植瘤模型小鼠腫瘤生長的抑制作用；（3）給藥期間，每日測量各組小鼠體重，密切觀察小鼠生理狀態(tài)；（4）Western-b

3、lot檢測裸鼠腫瘤組織中 HGF、c-Met、p-c-Met、VEGF、MMP2、E-cadherin等蛋白的表達(dá)情況；（5） HE染色計(jì)數(shù)肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)。
　　結(jié)果：1、（1）MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度的QHF作用于人高轉(zhuǎn)移肝癌HCCLM3細(xì)胞24 h、48 h、72 h后，細(xì)胞出現(xiàn)增殖抑制作用，且有劑量依賴性。隨著QHF濃度的不斷增加，其對(duì)HCCLM3細(xì)胞的增殖抑制作用更明顯：不同濃度之間均有差異，且隨著QHF濃度的增加，抑制率

4、不斷增加（P<0.05）。不同時(shí)間組之間也有差異，且具有時(shí)間依賴性，各濃度組72 h抑制率最大。藥物作用24 h在QHF1-QHF2濃度內(nèi)，其對(duì)細(xì)胞的生長增殖影響較小，其抑制率為14％-23%，因此選擇這兩個(gè)濃度進(jìn)行細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)；（2）細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示，QHF高低濃度組和 C-met抑制劑組的劃痕損傷的區(qū)域，細(xì)胞遷移均較正常對(duì)照組少，且QHF2組較QHF1組的劃痕損傷區(qū)域細(xì)胞遷移少；（3）Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，QHF組和C-m

5、et抑制劑組穿透過膜的細(xì)胞數(shù)均較正常對(duì)照組少，且 QHF2與 QHF1相比，明顯減少，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；（4）Western-blot結(jié)果顯示，QHF組和C-met抑制劑組干預(yù)處理HCCLM3細(xì)胞48 h后，HGF、VEGF和MMP9的表達(dá)量均明顯降低，p-c-Met、p-ERK和p-AKT的表達(dá)降低，但是三者的總蛋白不變，E-鈣粘蛋白的表達(dá)量增高；2、（1）成功建立人高轉(zhuǎn)移肝癌HCCLM3細(xì)胞裸鼠腋下移植瘤模型，各藥物處

6、理組的腫瘤質(zhì)量均低于生理鹽水組（1.60±0.15 g，1.17±0.21 g，1.27±0.11 g VS2.39±0.12 g，P﹤0.05），其抑瘤率分別為51.1%、33.0%、46.8%；（2）各用藥組裸鼠腋下移植瘤組織中HGF、p-c-Met、VEGF和MMP2的蛋白表達(dá)均較模型組降低，c-Met蛋白總量不變，E-鈣粘蛋白的表達(dá)量增高。（3）HE染色結(jié)果顯示，藥物干預(yù)組均能減少腫瘤肺部轉(zhuǎn)移灶數(shù)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）