維生素D非經(jīng)典作用的初步研究.pdf

1、維生素D的鈣磷調節(jié)作用已被人們所熟知，維生素D主要通過其活性形式與維生素D受體結合發(fā)揮作用。隨著研究的深入，人們在許多與鈣、磷代謝無關的組織和細胞上發(fā)現(xiàn)有維生素D受體。因此維生素D的非經(jīng)典作用引起了人們的重視。目前認為維生素D具有更廣泛的生理作用，如調節(jié)細胞增殖、誘導細胞分化，免疫增強，抗突變等。本文對維生素D的非經(jīng)典作用進行初步的研究。 目的：本課題主要從三個方面研究維生素D的非經(jīng)典作用：一、活性維生素D(1，25(OH)2

2、D3)對人卵巢癌細胞株(SKOV3)的單獨及聯(lián)合卡鉑(CBP)后的增殖抑制作用。二、維生素D對γ射線照射引起的小鼠造血損傷和DNA突變的保護作用。三、活性維生素D缺乏對脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)誘導的小鼠死亡率及腹腔巨噬細胞炎性因子TNF-α、NO釋放的影響。 方法：(1)用MTT法測定不同濃度的1，25(OH)2D3和CBP單獨作用于SKOV3細胞后細胞存活率和細胞周期的改變，以及不同順序聯(lián)合作用

3、后細胞存活率的變化情況；(2)以60Co γ射線6.0 Gy一次性全身照射小鼠建立照射損傷模型，觀察維生素D灌胃小鼠外周血細胞、骨髓細胞微核率及細胞周期的變化；(3)以1α羥化酶基因敲除小鼠(1α(OH)ase gene knock out mice)作為活性維生素D缺乏的動物模型，觀察LPS引起的小鼠死亡率和腹腔巨噬細胞腫瘤壞死因子TNF-α和一氧化氮(NO)的釋放情況。 結果：(1)1，25(OH)2D3作用于SKOV3，

4、使細胞存活率降低，10-7M 1，25(OH)2D3作用72h后細胞存活率為72.45％，10-8M 1，25(OH)2D3作用72 h后細胞存活率為82.11％；并使SKOV3細胞阻滯于G2期。當與CBP聯(lián)合作用時，效應取決于用藥順序。同時給藥時，10-7M 1，25(OH)2D3聯(lián)合2×10-5g／L CBP作用下細胞存活率為11.77％，10-8M 1，25(OH)2D3聯(lián)合2×10-5g／LCBP作用時細胞存活率為14.13％。

5、先后給藥時，抑制細胞增殖情況不及同時給藥時。(2)維生素D能夠一定程度上恢復照射損傷小鼠的外周血細胞，照射后第2d，白細胞升高至3.05×109幾，紅細胞、血小板計數(shù)也高于照射組；降低骨髓細胞微核率至10.34％，使照射引起的骨髓細胞G1期阻滯縮短，G2期阻滯延長。(3)LPS誘導1 α羥化酶基因敲除小鼠腹腔巨噬細胞炎癥因子TNF-α、NO的釋放顯著高于野生型小鼠。LPS腹腔注射后24 h，基因敲除小鼠組和野生型小鼠組動物生存率分別為1

6、0％和40％。 結論：(1)1，25(OH)2D3對SKOV3細胞有增殖抑制作用，并呈現(xiàn)劑量效應關系。1，25(OH)2D3與CBP聯(lián)合作用于SKOV3時，具有雙重作用，作用效果取決于用藥順序，與CBP同時加入時，表現(xiàn)為細胞增殖抑制。在CBP前、后加入時，表現(xiàn)為拮抗作用。 (2)維生素D對照射損傷的小鼠具有保護作用，可升高外周血白細胞，降低骨髓細胞微核率。 (3)1，25(OH)2D3對LPS誘導巨噬細胞炎