應用SSH-PCR技術進行混合血樣STR分型的初步研究.pdf

1、研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C構的學位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切相關責任。論文作者簽名顰盈趁日期：k紐[：∑中國醫(yī)科大學研究生學位論文版權使用授權書■本人完全了解中國醫(yī)科大學有關保護知識產(chǎn)權的規(guī)定，即：研

2、究生在攻讀學位期間論文工作的知識產(chǎn)權單位屬中國醫(yī)科大學。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為中國醫(yī)科大學，且導師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學。學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名：指導教師簽名：本所占的比例，基因型的組合，及待擴增樣本的DNA總量，即混合樣

3、本DNA分型的難易程度不盡相同?；旌蠘颖局休^少成分所占的比例小于5％或1：19，通常是無法檢測到。AmpFlSTR試劑盒建議，混合樣本中最少的成分應該大于35pg，才能得到可靠的分型結果。提高混合樣本中較少組分DNA分型成功率，是法醫(yī)工作者急需解決的難題之一，同時在醫(yī)學遺傳學領域也具有重要的研究價值。SSHPCR(SuppressionSubtractiveHybridizationSSH)是1996年Diatchenko等以抑制性PC

4、R為基礎、并結合標準化與消減雜交技術，建立的一項篩選與分離未知差異表達基因的新技術。其基本過程是：抽提兩種不同細胞的差異mRNA，反轉錄成cDNA，再用限制性內(nèi)切酶消化cDNA成平術端片段，將待研究的cDNA連接接頭后作為檢測子，將另一cDNA作為驅動子進行兩輪雜交，最后通過兩次PCR擴增得到差異表達的cDNA。該方法運用了雜交二級動力學原理，即豐度高的單鏈DNA在退火時產(chǎn)生同源雜交的速度快于豐度低的單鏈DNA，從而使原來在豐度上有差別

5、的單鏈DNA相對含量達到基本一致。而抑制PCR則是通過利用鏈內(nèi)退火優(yōu)于鏈間退火的特點，使兩端接上具有反向末端重復序列的同一接頭的非目片段在退火時產(chǎn)生類似發(fā)夾的互補結構，無法作為模板與引物配對，從而選擇性地抑制非目的基因片段的擴增。在標準體系中，運用SSH進行一輪消減雜交，可富集稀有序列1000倍以上，使某些低豐度表達的mRNA有望被檢出。鑒于SSH技術富集差異DNA序列的能力，本研究擬以PCRSTR擴增產(chǎn)物為研究對象，直接連接接頭，并通