牛角的形態(tài)發(fā)生及其真皮乳頭cDNA表達文庫的構建.pdf

1、牛角由額骨的骨質突與特化的角質外殼構成，是皮膚的衍生物。角發(fā)生于胎牛額部角原基，資料顯示，角原基約在胚齡70～100天時出現(xiàn)。角原基的形態(tài)發(fā)生過程與其它皮膚衍生物相似，是上皮一間充質相互作用的結果。研究牛角的形態(tài)發(fā)生及其信號調控，不僅可為發(fā)育生物學器官形態(tài)發(fā)生過程中，上皮．間充質相互作用機理的研究提供新的模型，對毛囊生物學的研究也具有重要理論意義和參考價值。 本試驗研究材料為18頭胚齡E85-280d的公牛胚胎及五對2～3歲成年

2、公牛角。通過對胎牛角原基與成年牛角真皮進行組織切片HE染色、β-catenin的免疫組織化學以及構建生長期牛角真皮乳頭cDNA表達文庫，初步研究了胎牛角原基的形態(tài)變化過程及成年牛角真皮結構特點，檢測了β-catenin在各胚齡胎牛角原基中的表達，并對其在角原基形態(tài)發(fā)生過程中的作用進行了探討，為進一步研究真皮乳頭的功能基因在牛角形態(tài)發(fā)生中的作用也奠定了基礎。結果和結論如下： 1、組織切片HE染色結果表明：角原基表皮厚度隨胎齡增加逐

3、漸變薄，表皮細胞形態(tài)由規(guī)則向不規(guī)則過渡，毛囊發(fā)育較身體其它部位早，且體積較大。牛胚胎早期(E85～140d)，角原基表皮平均厚度最大，基底層細胞為單層柱狀，其他細胞呈多邊形，細胞核質比小；牛胚胎中期至中后期(E141～210d)，表皮平均厚度逐漸減小，細胞體積亦減小，仍然呈多邊形，核質比增大，大部分毛囊已發(fā)育成熟，毛干正在形成或已經頂出皮膚；牛胚胎后期(E211～280d)，表皮總厚度最薄，但角質層增厚，細胞形狀不規(guī)則，表皮各層結構界限

4、模糊。成年牛角真皮厚度由角根部向上逐漸變薄，到頂部又變厚，其表面有很多真皮乳頭，角基部的乳頭短而密，向上則逐漸變長變稀，至角頂部又變密。真皮乳頭緊緊嵌入角質外殼內層壁中。 2、β-catenin免疫組化研究表明：角原基β-catenin的表達隨胎齡的增加從表皮基底層細胞到所有表皮細胞，且陽性逐漸增強，毛囊持續(xù)表達β-catenin。牛胚胎早期，D．catenin在基底層細胞胞漿表達為陽性，其它表皮細胞膜表達呈陽性而胞漿為弱陽性，

5、毛囊隆突區(qū)、毛母質和外根鞘均有表達；牛胚胎中期，β-catenin在所有表皮細胞胞漿及部分細胞核中為陽性，其表達持續(xù)存在于毛囊隆突區(qū)、毛母質和外根鞘，且外根鞘表達增強；牛胚胎后期，β-catenin的表達為強陽性，毛囊結構及其中β-catenin的表達均未發(fā)生明顯變化。 3、成功構建了牛角真皮乳頭cDNA表達文庫，初級文庫的庫容量為6.07x10<'5>，重組率高達93％，擴增后，文庫滴度為4×10<'5>pfu/ml。根據(jù)美國