淫羊藿和巴戟天中藥提取物對中國恒河猴不同極化條件下原代巨噬細胞基因表達影響的研究.pdf

1、目的:
　　探討中藥淫羊藿、巴戟天提取物對恒河猴單核衍生的巨噬細胞在不同極化條件下基因表達的影響，分析這兩種中藥可能的免疫調(diào)節(jié)的作用機制。
　　方法:
　　密度梯度離心法分離中國恒河猴外周血單個核細胞(PBMCs)，采用貼壁法分離出單核細胞，并以粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激5天以使單核細胞分化成巨噬細胞，隨后不加入極化因子形成M0型巨噬細胞，以干擾素γ(IFN-γ)或地塞米松繼續(xù)培養(yǎng)2天誘導巨噬細胞極

2、化為M1和M2c表型，同時分別加入淫羊藿、巴戟天提取物進行干預(yù)，隨后提取mRNA并逆轉(zhuǎn)錄后，以實時熒光定量PCR檢測CD4、FoxP3、CTLA-4、CCR5、IDO、IL-10、TGF-β等基因表達量，以GAPDH為參照基因，與空白組進行對比。
　　結(jié)果:
　　與空白對照組相比，加入巴戟天提取物培養(yǎng)的M0巨噬細胞基因表達上調(diào)不明顯;經(jīng)淫羊藿提取物培養(yǎng)的M0巨噬細胞，CCR5基因表達量上調(diào)4.21倍，TGF-β上調(diào)7.66倍

3、，而CD4、CTLA-4、FoxP3、IL-10、IDO的基因表達無明顯變化。經(jīng)淫羊藿提取物刺激的M1型巨噬細胞，IL-10的表達量上調(diào)11.83倍，F(xiàn)oxP3上調(diào)4.55倍，IDO、CCR5、CD4、CTLA-4無明顯變化，TGF-β未測出;而由巴戟天提取物刺激的M1型巨噬細胞，CTLA-4基因表達量上調(diào)3.22倍，F(xiàn)oxP3上調(diào)3.69倍，CCR5、CD4、IL-10、IDO均無明顯變化，TGF-β未測出。經(jīng)淫羊藿提取物培養(yǎng)刺激的M

4、2c型巨噬細胞，CCR5基因增加5.94倍，TGF-β基因增加3.53倍，CTLA-4、FoxP3、IDO、IL-10等基因無明顯變化，經(jīng)巴戟天提取物刺激的M2c型巨噬細胞，CCR5基因增加6.43倍，CTLA-4基因增加3.28倍，IL-10基因增加3.76倍，TGF-β基因增加11.05倍，CD4基因增加3.77倍，F(xiàn)oxP3和IDO兩個基因無明顯變化。
　　結(jié)論:
　　經(jīng)淫羊藿提取物培養(yǎng)的M0型巨噬細胞，則能夠上調(diào)CC

5、R5和TGF-β的基因表達，呈現(xiàn)出促炎、促纖維化的作用。經(jīng)淫羊藿和巴戟天提取物培養(yǎng)后，M1型巨噬細胞能上調(diào)IL-10、FoxP3、CTLA-4等抑炎、抑纖維化基因表達，減輕炎癥反應(yīng)和組織纖維化，有利于組織結(jié)構(gòu)的維持和保護。通過淫羊藿和巴戟天提取物培養(yǎng)后，M2c型巨噬細胞的CCR5、CD4和TGF-β基因表達大量增加。表現(xiàn)出促炎和促纖維化的免疫調(diào)節(jié)作用?？偨Y(jié)本實驗的結(jié)果，淫羊藿和巴戟天提取物通過對不同極化條件下的巨噬細胞基因表達影響的不同