中國大陸獼猴屬物種資源快速鑒定方法的研究.pdf

1、中國大陸獼猴屬物種資源已十分稀少并具減少趨勢，在野外調(diào)查和保護執(zhí)法工作中獲得的獼猴屬疑似樣品往往是污染、腐敗、殘缺不全（如毛發(fā)、骨骼、蹄甲、臟器、肌肉纖維等）或極微量的檢材，難以檢查辨認。為了更有力的保護獼猴屬野生動物，打擊非法走私和狩獵，建立對我國大陸獼猴屬物種的分子生物學(xué)鑒定技術(shù)是十分有意義的。 試驗一：本試驗主要采用非損傷性的方法，從中國大陸四種獼猴屬物種糞樣中提取DNA，同時從Genbank下載一些常見動物、獼猴屬5種動

2、物及同科相近屬、同目相近科動物的cyt b基因序列，利用軟件設(shè)計并合成獼猴屬通用引物1對（Ms/Ma）、豚尾猴特異性引物1對（Ts/Ta）、獼猴特異性引物（Ys/Ya）、短尾猴特異性引物2對（Ds1/Da1、Ds2/Da2）、熊猴特異性引物2對（Xs1/Xa1、Xs2/Xa2），并通過大量試驗對其特異性、穩(wěn)定性和敏感性進行驗證。結(jié)果表明：通用引物Ma、Ms對我國獼猴屬物種DNA特異，只能特異性地擴增獼猴屬物種DNA，而對一些常見動物及近

3、源動物的DNA不能擴增；其它幾對引物也具有良好的特異性和穩(wěn)定性。尤其是敏感性試驗，測出了各引物能檢測出該物種所需的最低濃度。 試驗二：利用Primer Express軟件設(shè)計合成Taqman探針：豚尾猴1條（Ts/Ta）、獼猴3條（Ms0/Ma0、Ms1/Ma1、Ms2/Ma2）、短尾猴1條（Ds1/Da1）、熊猴1條（Xs1/Xa1），經(jīng)大量試驗驗證，結(jié)果表明：獼猴探針（Ms0/Ma0）、豚尾猴探針（Ts/Ta）和短尾猴（Ds

4、1/Da1）探針特異性很好，能將其與中國大陸其它獼猴屬區(qū)分開來。獼猴探針（Ms1/Ma1、Ms2/Ma2）能首先將獼猴、短尾猴與熊猴、豚尾猴區(qū)分開，再利用短尾猴探針（Ds1/Da1）將獼猴和短尾猴區(qū)分開即可。本試驗首次采用了分步鑒定的方法，這對其它野生動物的鑒定具有借鑒意義。 試驗三：從多種微量檢材：獼猴毛發(fā)、肌肉，短尾猴毛發(fā)、血液中提取DNA，與從糞樣中取得的DNA模板做比較，檢驗結(jié)果的一致性。結(jié)果表明：從毛發(fā)、肌肉、血液中獲

5、取的DNA與從糞樣中取得的DNA檢測結(jié)果具有一致性。表明本方法穩(wěn)定、可靠，從而達到對獼猴屬微量組織鑒定的目的。 試驗四：對瓊脂糖凝膠電泳跑的比較亮的目的條帶進行切膠回收并測序，看結(jié)果是否是需要的目的條帶。結(jié)果表明，測序所得的序列與網(wǎng)上發(fā)布的序列結(jié)果一致，即為所要的目的條帶。同時還設(shè)計測序引物，測得了四種獼猴屬物種的部分Cytb序列，為以后的研究提取科學(xué)依據(jù)。 本試驗建立了我國大陸獼猴屬4種動物的分子生物學(xué)查驗和實驗室確證