ELP-Intein系統(tǒng)在抗菌肽基因工程中的應(yīng)用.pdf

1、抗菌肽是生物體內(nèi)經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的一類具有生物活性的小分子多肽,存在于多種生物體中,是宿主免疫防御系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分。這些抗菌肽能作用于革蘭氏陰性、革蘭氏陽性細(xì)菌、真菌、寄生蟲、腫瘤細(xì)胞甚至是某些具有包膜的病毒,而絕大多數(shù)抗菌肽對(duì)哺乳動(dòng)物正常細(xì)胞無害,并且其殺菌機(jī)理與傳統(tǒng)抗生素完全不同,被學(xué)者認(rèn)為是一種天然抗生素而備受青睞。
　　 近年來,研究者開發(fā)了很多種技術(shù)通過重組表達(dá)的策略來獲得抗菌肽。原核表達(dá)是目前最常用也是最經(jīng)濟(jì)的方法。

2、本實(shí)驗(yàn)利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)兩種抗菌肽,一種是天蠶素家族的家蠶抗菌肽CM4,另一種是防御素家族的人p防御素(HβD4),然后用一種完全無需色譜層析的方法純化獲得目的蛋白。我們將CM4和HβD4的基因克隆入含有類彈性蛋白(ELP)和內(nèi)含肽(Intein)標(biāo)簽的載體構(gòu)建成表達(dá)載體pET-EI-CM4和pET-EI-HβD4。經(jīng)過誘導(dǎo),抗菌肽與這兩種標(biāo)簽形成的融合蛋白(EI-CM4、EI-HβD4)以完全可溶的形式表達(dá),利用ELP的特殊性狀