丁桂凝膠膏劑的制備工藝及主要藥效學研究.pdf

1、肌肉酸楚、關節(jié)疼痛是人們在現(xiàn)代化的都市生活中經(jīng)常面臨的病證之一，近年來，頸肩腰腿痛的發(fā)病率逐年增高，肌肉、關節(jié)疼痛的治療已經(jīng)成為一個公眾性的健康問題。西醫(yī)高效治療疼痛的同時，帶來諸多的不良反應，給患者帶來新的痛苦，治療的社會成本和經(jīng)濟成本較高。中醫(yī)藥治療肌肉、關節(jié)疼痛具有方法靈活、療效顯著、不良反應相對較小，并且價格相對較低的特點。丁桂活絡膏（批準文號：川藥制字Z20080855）是四川省骨科醫(yī)院鄭氏傷科治療各類疼痛最常用的制劑之一，臨

2、床應用三十余年，治療頸肩腰腿疼痛，以及跌打損傷、運動創(chuàng)傷、軟組織損傷中后期的各類疼痛療效顯著。本課題在國家科技部“科研院所技術開發(fā)研究專項”項目（2012EG145135）的資助下，結(jié)合長期臨床應用基礎，在前期提取工藝的基礎上，針對頸肩腰腿痛臨床治療特點，在中醫(yī)藥理論的指導下，將傳統(tǒng)中醫(yī)藥和現(xiàn)代經(jīng)皮給藥理論相結(jié)合，研制成療效獨特、使用方便、不良反應小、無創(chuàng)傷給藥的新型中藥復方經(jīng)皮給藥制劑——丁桂凝膠膏劑。本論文主要從處方基質(zhì)、促透劑、成

3、型工藝、質(zhì)量標準、穩(wěn)定性、皮膚安全性、初步藥效學等方面進行研究。
　　1.丁桂凝膠膏劑基質(zhì)處方與成型工藝條件研究
　　1.1 丁桂凝膠膏劑基質(zhì)骨架的選擇
　　以外觀評價、初黏力、持黏力、剝離強度為評價指標，結(jié)合凝膠時間，對幾種常用的骨架成分進行了比較研究，篩選出NP-700作為本處方的骨架成分。
　　1.2 以NP-700為骨架的基質(zhì)處方研究
　　以外觀評價、初黏力、持黏力、剝離強度為評價指標，采用單因素法

4、進行了丁桂凝膠膏劑基質(zhì)的初步篩選，確定了NP-700、卡波姆、酒石酸、甘油的較適宜用量范圍，采用正交設計等方法，優(yōu)選出丁桂凝膠膏劑的基質(zhì)處方為：NP-700︰甘羥鋁︰EDTA︰高嶺土︰P VPP︰甘油︰卡波姆︰PVP︰酒石酸︰蒸餾水︰浸膏=6︰0.24︰0.1︰5︰2︰30︰0.1︰2︰0.2︰49.36︰5。經(jīng)驗證，該配方制備的丁桂凝膠膏劑外觀美觀、黏性較好。
　　1.3 成型工藝條件考察
　　以外觀評價與黏性評價為指標，

5、考察丁桂凝膠膏劑成型工藝中的攪拌速率、攪拌時間等條件，優(yōu)選出成型工藝：將NP-7006g、甘羥鋁0.24g、EDTA0.1g、高嶺土5g、PVPP2g加入甘油30g中攪拌均勻，再加入浸膏5g為A相，將卡波姆0.1g、PVP2g溶于蒸餾水49.36g中過夜使充分溶脹，再向其中加入酒石酸0.2g為B相，將B相緩緩加入A相中，在常溫下，先以150r/min的速度攪拌3min，再以100r/min的速度攪拌27min，總攪拌時間為30min，制

6、成的凝膠膏劑外觀與黏性俱佳。
　　2.丁桂凝膠膏劑促透劑的篩選研究
　　經(jīng)皮給藥制劑吸收的最大障礙是皮膚對藥物滲透的屏障作用，因此，對于經(jīng)皮給藥制劑的研究，選擇理想的透皮吸收促進劑以使足夠量的藥物進入人體內(nèi)從而起到治療作用具有重要意義。
　　2.1 丁桂凝膠膏劑體外經(jīng)皮滲透試驗方法的建立
　　通過考察不同動物皮膚與人造皮膚Stra t-M膜、不同接收介質(zhì)、不同實驗溫度對丁桂凝膠膏劑君藥羌活中的主要有效成分羌活醇的

7、體外經(jīng)皮滲透行為的影響，建立了丁桂凝膠膏劑中羌活醇的體外經(jīng)皮滲透的實驗方法：采用Strat-M膜為透皮屏障，30％的乙醇生理鹽水為接收介質(zhì)，實驗溫度37℃，磁攪拌轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速600r/min。
　　2.2 不同促透劑對丁桂凝膠膏劑中羌活醇體外經(jīng)皮滲透的影響
　　采用單因素考察法考察了0.5%、1%、2%、3%、4%、5%氮酮，2%、4%、6%、8%、10%丙二醇，0.25%、0.5%、1%、1.5%、2%薄荷腦對丁桂凝膠膏劑體外

8、透皮吸收的影響，結(jié)果顯示氮酮（0.5%～2%）、丙二醇（4%～8%）、薄荷腦（0.5%～1.5%）在一定比例范圍內(nèi)對丁桂凝膠膏劑中羌活醇具有不同程度的促透作用，且對丁桂凝膠膏劑的外觀、黏性不造成嚴重影響，油酸、NMP不適合用作丁桂凝膠膏劑的促透劑。
　　2.3 正交實驗設計優(yōu)選丁桂凝膠膏劑中的復合促透劑
　　根據(jù)氮酮、丙二醇、薄荷腦的單因素考察結(jié)果，以外觀評分、黏性評分、羌活醇累積透皮率為指標，采用加權綜合評分法，運用正交實

9、驗設計法優(yōu)選了復活促透劑，結(jié)果顯示，由氮酮（0.5%）-丙二醇（8%）-薄荷腦（1.5%）組成的復合促透劑對丁桂凝膠膏劑的外觀與黏性影響較小，而促進透皮吸收的性能優(yōu)于單種促透劑的使用。通過與丁桂活絡膏橡膠膏劑的體外透皮試驗對比研究，顯示凝膠膏劑的透皮吸收性能明顯優(yōu)于橡膠膏劑。
　　3.丁桂凝膠膏劑的工藝放大試驗研究
　　結(jié)合大生產(chǎn)中的實際情況，對實驗室確定的制備工藝進行了放大試驗，確定丁桂凝膠膏劑的制備工藝為：將NP-700

10、6g、甘羥鋁0.24g、EDTA0.1g、高嶺土5g、P VPP2g加入甘油30g中攪拌均勻，再加入浸膏5g為A相，將卡波姆0.1g、PVP2g溶于蒸餾水49.36g中過夜使充分溶脹，再向其中加入酒石酸0.2g為B相，將B相緩緩加入A相中，在常溫下，先以150r/min的速度攪拌3min，再以100r/min的速度攪拌27min，總攪拌時間為30min，涂布于無紡布上，蓋上PE壓花膜，切割，保存。
　　4.丁桂凝膠膏劑的質(zhì)量標準研

11、究
　　根據(jù)《中國藥典》現(xiàn)行版一部附錄貼膏劑項下凝膠膏劑的制劑通則和要求，制定了丁桂凝膠膏劑的質(zhì)量標準。采用薄層色譜法對羌活、延胡索、獨活、木香、丁香、肉桂、當歸、川芎、白芷進行了定性鑒別，結(jié)果顯示，鑒別方法簡便、可靠、專屬性強、陰性無干擾。對含膏量、賦形性、黏附性、微生物限度檢查項目進行了研究，規(guī)定丁桂凝膠膏劑每100cm2含膏量應不少于10.0g，黏附性測試照《中國藥典》現(xiàn)行版一部附錄XIIE項下第一法、第二法、第三法測定，初

12、黏力測試丁桂凝膠膏劑應能粘住4號鋼球，持黏力測試丁桂凝膠膏劑1h內(nèi)位移距離不應超過4.0cm，剝離強度測試丁桂凝膠膏劑的180o剝離強度應不低于0.04kN/m。采用高效液相色譜法對丁桂凝膠膏劑中羌活醇、延胡索乙素的含量測定進行研究，根據(jù)研究結(jié)果，規(guī)定本品每片含羌活以羌活醇（C21H22O5）計不得少于0.7mg，含延胡索以延胡索乙素（C21H25NO4）計不得少于0.18mg。從而為控制丁桂凝膠膏劑的內(nèi)在質(zhì)量提供了可靠依據(jù)。
　

13、　5.丁桂凝膠膏劑的穩(wěn)定性研究
　　按照擬定的質(zhì)量標準草案對三批丁桂凝膠膏劑采用紙鋁復合包裝，以丁桂凝膠膏劑的外觀性狀、鑒別，含膏量、黏附性、微生物檢查以及丁桂凝膠膏劑中羌活醇、延胡索乙素的含量測定等為考核指標，進行了6個月的加速穩(wěn)定性試驗和長期穩(wěn)定性試驗，初步考察丁桂凝膠膏劑的穩(wěn)定性。結(jié)果表明丁桂凝膠膏劑在樣品包裝條件下，三批樣品在溫度40℃±2℃、相對濕度75%±5%的條件及溫度25℃±2℃、相對濕度60%±10%的條件下分別

14、考察6個月，外觀無變化，鑒別均呈正反應，檢查、含膏量、黏附性、含量測定合格，微生物檢查檢查符合規(guī)定。說明樣品6個月內(nèi)穩(wěn)定。
　　6.丁桂凝膠膏劑和丁桂活絡膏的體外透皮吸收對比研究
　　丁桂凝膠膏劑和丁桂活絡膏的體外透皮試驗對比研究結(jié)果顯示，丁桂凝膠膏劑48h累積透皮率為65.62%，透皮速率為1.37%/h，丁桂活絡膏48h累積透皮率為30.88%，透皮速率為0.643%/h。在第2、4、6、8、12、24、48h，凝膠膏劑

15、的累積透皮率分別為丁桂活絡膏的1.22、1.21、1.51、1.57、1.76、2.14、2.12倍，2h～48 h期間，丁桂凝膠膏劑的整體透皮速率約為丁桂活絡膏的2倍，48h內(nèi)丁桂凝膠膏劑累積透皮率約為64%。丁桂凝膠膏劑的透皮吸收效果較丁桂活絡膏更好。
　　7.丁桂凝膠膏劑的安全性實驗研究
　　通過皮膚刺激性實驗研究可知，以日本大耳白家兔為研究對象，丁桂凝膠膏劑單次或連續(xù)用藥時，家兔皮膚均未觀察到水腫、色素沉著、滲血點、

16、皮膚菲薄、體重異常，丁桂凝膠膏劑不會引起家兔皮膚的刺激反應；通過皮膚過敏性實驗研究可知，以白色皮毛豚鼠為研究對象，丁桂凝膠膏劑反復給藥后，不會引起豚鼠皮膚局部過敏反應，亦無全身性的不適反應，未發(fā)現(xiàn)丁桂凝膠膏劑有明顯致敏作用。
　　8.丁桂凝膠膏劑的初步藥效學研究
　　通過考察丁桂凝膠膏劑對醋酸致小鼠扭體反應、對熱板刺激小鼠疼痛反應以及對福爾馬林對小鼠的致痛實驗的影響，初步認為丁桂凝膠膏劑有明顯的鎮(zhèn)痛作用。丁桂凝膠膏劑高劑量組

17、、等效劑量組、丁桂活絡膏組均可不同程度地抑制熱板刺激引起的小鼠疼痛反應，且在用藥90min后作用明顯增強（P<0.05）。丁桂凝膠膏劑高劑量組、等效劑量組、丁桂活絡膏組均能明顯對抗福爾馬林導致的Ⅰ相神經(jīng)疼痛、Ⅱ相炎性疼痛反應（P<0.05）。但丁桂凝膠膏劑各劑量組與丁桂活絡膏組對扭體反應次數(shù)的改變與對照組相比無顯著性差異。
　　通過抗炎實驗發(fā)現(xiàn)，丁桂凝膠膏劑各劑量組僅有對抗二甲苯致小鼠耳腫脹的作用趨勢，與模型組比較均無顯著性差異。

18、丁桂凝膠膏劑高劑量組與等效劑量組均能一定程度地降低角叉菜膠對大鼠足腫脹的影響（P<0.05）。
　　通過上述實驗研究，初步認為丁桂凝膠膏劑有一定的鎮(zhèn)痛、抗炎作用。
　　9.丁桂凝膠膏劑鎮(zhèn)痛、抗炎作用機理初步研究
　　通過考察丁桂凝膠膏劑對福爾馬林致痛模型小鼠血清中IL-1與TNF-α含量的影響，初步認為丁桂凝膠膏劑高劑量組能顯著降低模型動物血清中的IL-1含量（P<0.05），丁桂凝膠膏劑高劑量組、等效劑量組及丁桂活絡

19、膏組能顯著降低模型動物血清中的TNF-α含量（P<0.05，P<0.01）。
　　通過考察丁桂凝膠膏劑對角叉菜膠足腫脹模型大鼠血清中IL-1與TNF-α含量的影響，初步認為丁桂凝膠膏劑各劑量組及丁桂活絡膏組具有降低模型動物血清中IL-1含量的趨勢，丁桂凝膠膏劑高劑量組及丁桂活絡膏組能顯著降低模型動物血清中的TNF-α含量（P<0.05）。
　　通過考察丁桂凝膠膏劑對佐劑關節(jié)炎模型大鼠左、右后足踝關節(jié)周長，以及血清中IL-1、

20、TNF-α、IgG、IgM、5-HT、PGE2、NO含量的影響，初步認為丁桂凝膠膏劑高劑量組、等效劑量組、丁桂活絡膏組對上述指標有一定的影響，表現(xiàn)為：丁桂高劑量組、丁桂等效劑量組及丁桂活絡膏組對模型大鼠右、左后足踝關節(jié)的異常腫脹有改善作用，丁桂高劑量組對模型大鼠IgG含量的增加有顯著性改善（P<0.05），丁桂高劑量組、丁桂等效劑量組與丁桂活絡膏組對模型大鼠NO含量的增加僅有降低趨勢而無顯著性差異。
　　通過對丁桂凝膠膏劑鎮(zhèn)痛、抗