丙型肝炎病毒受體OCLN胞外環(huán)重構(gòu)表達(dá)及功能的研究.pdf

1、丙型肝炎病毒是黃病毒科丙型肝炎病毒屬的重要人類病原體，其慢性感染通常會(huì)導(dǎo)致肝纖維化，肝硬化，肝癌等嚴(yán)重肝病。由于HCV具有多種基因型，基因型高度變異，且缺乏有效的小動(dòng)物模型等，針對(duì)于HCV病毒的疫苗研究目前沒有實(shí)質(zhì)性突破。雖然現(xiàn)在作用于HCV的直接抗病毒藥物(DAAs)具有較好的持續(xù)病毒應(yīng)答率(SVR)，但是該治療方法仍有病毒易耐受，治療周期長(zhǎng)，靶點(diǎn)范圍相對(duì)較窄以及治療費(fèi)用昂貴等問題。DAAs藥物主要作用于HCV復(fù)制階段，HCV受體則在

2、病毒入侵過程中起關(guān)鍵作用。鑒于此，HCV受體類似物可作為一種新型的HCV入侵的抑制劑，在HCV的治療中起到協(xié)同作用。
　　OCLN是HCV入侵過程中的重要受體之一，具有種屬特異性。本研究以O(shè)CLN的胞外環(huán)為主要研究對(duì)象，以HIVgp41蛋白N34和C36多肽在融合構(gòu)象的六螺旋束構(gòu)象為模型，構(gòu)建一個(gè)六螺旋束的骨架蛋白(6HV1)。在此基礎(chǔ)上，將OCLN的ECL1和ECL2兩個(gè)胞外環(huán)進(jìn)行不同組合后裝配到該六螺旋束骨架蛋白上，這些OCL

3、N胞外環(huán)的重構(gòu)蛋白成功克隆并進(jìn)行體外表達(dá)和純化。利用HCV細(xì)胞源病毒系統(tǒng)，我們篩選出雙環(huán)構(gòu)建蛋白D1ECL1S+D2ECL2在沒有細(xì)胞毒性條件下抑制HCV入侵效果最好。圓二色譜實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，D1ECL1S+D2ECL2的構(gòu)建，因OCLN胞外環(huán)的插入，改變了重構(gòu)蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)中的α螺旋占比;熱變性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該蛋白結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，解螺旋溫度約為89.09℃。時(shí)間節(jié)點(diǎn)(time of addition)實(shí)驗(yàn)證明D1ECL1S+D2ECLS主要是在HCV

4、入侵的早期發(fā)揮作用，且主要作用于HCV病毒與宿主細(xì)胞的結(jié)合階段。通過蛋白作用靶點(diǎn)的研究，我們發(fā)現(xiàn)D1ECL1S+D2ECL2主要是與HCV病毒粒子相互結(jié)合，從而抑制HCV的入侵，這與我們的實(shí)驗(yàn)構(gòu)想相一致。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)，D1ECL1S+D2ECL2對(duì)HCV多種基因型的HCV假病毒的感染具有較好的抑制效果。
　　綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)了一種潛在的針對(duì)HCV入侵的廣譜抑制劑，對(duì)DAAs藥物的治療可能起到協(xié)同作用。且通過一種新型構(gòu)建，得到了