幽門螺桿菌、EBV與賁門腺癌和遠(yuǎn)端胃腺癌的關(guān)系.pdf

1、目的：在世界范圍內(nèi)，胃癌死亡率占惡性腫瘤死亡率的第二位。在全世界每年新確診的胃癌病例中，我國所占比例高達(dá)42％，尤其在我國北方胃癌高發(fā)區(qū)，胃癌年死亡率為77.67/105。近幾十年來，胃癌的發(fā)生部位發(fā)生明顯變化，來源于胃遠(yuǎn)端部位（胃竇）胃癌的發(fā)生率明顯下降，而食管胃交界部位（esophagogastric junction, EGJ）腫瘤（包括遠(yuǎn)端食管腺癌和賁門腺癌）的發(fā)生率呈明顯增高趨勢(shì)。此變化趨勢(shì)在西方國家尤為明顯，并引起廣大學(xué)者的

2、關(guān)注。1996年Siewert等將位于EGJ區(qū)域的腺癌命名為食管胃交界腺癌（Adenocarcinoma of Esophagogastric Junction，AEG），并根據(jù)腫瘤中心距Z線距離分為三型，分別為Siewert I型、II型和III型。在我國，由于Siewert I型AEG（食管遠(yuǎn)端腺癌）發(fā)病率很低，大部分AEG為Siewert II型和III型，國內(nèi)學(xué)者籠統(tǒng)稱為賁門腺癌（adenocarcinoma of gastri

3、c cardia,GCA）。
　　GCA在腫瘤的發(fā)生機(jī)制、生物學(xué)行為等方面不同于非賁門胃癌，為一種獨(dú)特的胃癌病理學(xué)亞型。從病因?qū)W上分析，GCA主要與胃食管反流病、肥胖和白色人種有關(guān)，而遠(yuǎn)端胃腺癌（Distal Gastric Adenocarcinoma，DGA）的發(fā)生與幽門螺桿菌（Helicobacter pylori， Hp）感染和膳食因素密切相關(guān)。目前，已有研究表明Hp感染是DGA發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素，而在GCA發(fā)生中的作用卻

4、存在很大爭議。有學(xué)者認(rèn)為，血清Hp陽性與GCA發(fā)病無明顯相關(guān)，而有些學(xué)者持不同的觀點(diǎn)，認(rèn)為Hp感染在一定程度上有保護(hù)賁門黏膜作用。
　　EBV(Epstein-Barr virus)是胃癌發(fā)生的另一危險(xiǎn)因素。研究表明，胃癌患者中約1.3％-20.1％存在EBV感染。而且EBV相關(guān)胃癌多見于近端胃以及彌漫型胃癌中。而另一研究持完全相反的觀點(diǎn)，認(rèn)為在腸型胃癌中EBV感染頻率更高。目前，有關(guān)EBV和胃癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)及發(fā)病部位之間關(guān)系的研究甚

5、少，仍需進(jìn)一步研究。
　　研究發(fā)現(xiàn)Hp和EBV都與胃癌的發(fā)生有關(guān)，已有研究表明Hp是DGA的重要危險(xiǎn)因素，EBV相關(guān)胃癌則多見于近端以及彌漫型胃癌中，那Hp和EBV感染是否在不同位置胃癌存在差異呢？這需要我們進(jìn)一步研究。研究表明在Hp感染的胃癌組血清中TNF-α的表達(dá)顯著升高，TNF-α的表達(dá)會(huì)通過傳統(tǒng)途徑激活 NF-κB通路，相反，TNF-α過表達(dá)也會(huì)增加胃粘膜組織Hp的易感性，在癌變過程中發(fā)揮重要作用。NF-κB是一個(gè)重要的核

6、轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥和癌癥發(fā)展之間起一定的橋梁作用。Hp感染或相關(guān)蛋白也可直接刺激上皮細(xì)胞NF-κB的表達(dá)。同樣的，Hp感染也可以引起NF-κB介導(dǎo)的TNF-αmRNA的表達(dá)。最近，有研究顯示EBV可以通過激活NF-κB途徑來誘使免疫抑制蛋白吲哚胺2,3-雙加氧酶（IDO）的表達(dá)使人單核巨噬細(xì)胞中TNF-α和IL-6的表達(dá)升高。
　　本研究擬采用改良Giemsa、亞甲藍(lán)、Warthin-Starry鍍銀以及免疫組織化學(xué)染色方法觀察胃癌

7、組織中Hp感染情況，選用Real-Time PCR技術(shù)比較不同部位胃癌患者Hp、EBV檢出率。同時(shí)，采用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)NF-κB、TNF-α在不同部位胃癌組織中的表達(dá)，進(jìn)一步觀察Hp感染對(duì)NF-κB、TNF-α表達(dá)的影響，進(jìn)而系統(tǒng)分析Hp、EBV感染在GCA和DGA發(fā)生過程中可能存在的差異，為高發(fā)區(qū)胃癌的防治提供科學(xué)的理論依據(jù)。
　　方法：
　　1、Hp的傳統(tǒng)染色
　　應(yīng)用改良的Giemsa染色、亞甲藍(lán)染色、Wa

8、rthin-Starry銀染色和蘇木素-伊紅染色（HE）對(duì)GCA和DGA患者組織標(biāo)本進(jìn)行Hp傳統(tǒng)染色。
　　2、免疫組織化學(xué)分析
　　選取2011-2014年河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院手術(shù)切除胃癌組織標(biāo)本共113例，其中GCA62例，DGA51例(圖1-2)。運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法研究NF-κB、TNF-α在GCA與DGA中的表達(dá)情況。
　　3、Real-Time PCR技術(shù)檢測(cè)胃癌患者Hp及EBV感染情況
　　切取胃癌

9、組織標(biāo)本6片，每片8-10微米，采用DNA提取試劑盒提取組織總DNA。應(yīng)用GoTaq?qPCR試劑盒對(duì)組織DNA進(jìn)行Real-time PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系為20ul：10ul GoTaq?qPCR預(yù)混液、2ul模板DNA、上下游引物各0.4μL，引物終濃度為0.2μM。CT≤35作為陽性結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)。
　　4、統(tǒng)計(jì)分析
　　應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并應(yīng)用?2卡方檢驗(yàn)和Fisher確切概率進(jìn)行分析。P<0.0

10、5具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、Hp在胃癌患者中的感染情況
　　Real-Time PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，在113例胃癌標(biāo)本中85例（75.2％）顯示 Hp感染。Hp感染患者中細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白 A(Cytotoxin associated geneA, CagA)，細(xì)胞空泡毒素 A(vaeuolo-ating CytotoxinA,VacA)及CagA+/VacA+檢出率分別為30.1％、38.9％及21.2％。

11、
　　2、比較賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌患者Hp感染情況
　　GCA與DGA患者中Hp16s rRNA檢出率分別為73.8%（45/61），和76.9%（40/52），兩組之間統(tǒng)計(jì)學(xué)無顯著差異（P>0.05）。GCA患者Hp CagA+檢出率為31.1%（19/61），DGA組為28.8%（15/52），二者之間無明顯差異（P＞0.05）。然而，GCA患者Hp VacA+檢出率卻明顯高于DGA（49.2%vs26.9%，P<0.0

12、5）。而且，CagA+/VacA+在GCA和DGA兩組之間也存在顯著差異（73.3％ vs45.0％，P<0.05）。
　　3、胃癌患者中EBV檢出情況
　　Real-Time PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，胃癌患者中 EBV的檢出率為15.6%（15/96）。其中在GCA中的感染率為21.3％（10/47），高于DGA腫瘤組織中的檢出率（10.2％），但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　4、在GCA和DGA之間Hp和EBV的雙重

13、感染
　　進(jìn)一步分析不同部位胃癌患者 Hp、EBV雙重感染情況，GCA患者Hp VacA+且有EBV感染的比率為8.5％（4/47），明顯高于DGA組患者的感染率（4.1％，2/49，P<0.05）。
　　5、Hp感染與胃癌臨床病理特征的關(guān)系
　　在 GCA及 DGA患者中，≤60歲患者 Hp CagA+菌株感染率明顯高于>60歲組（P<0.05）。在DGA患者中，Hp VacA+菌株感染與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期密切相關(guān)

14、（P<0.05）。而在GCA患者中與兩者無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。進(jìn)一步分析不同部位胃癌中 Hp感染情況，發(fā)現(xiàn)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的GCA病例中Hp VacA+檢出率為47.1％(16/34），而在DGA患者僅為10.0％（3/30），二者具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。
　　6、TNF-α和NF-κB在GCA和DGA中的表達(dá)
　　GCA腫瘤組織中 TNF-α的表達(dá)明顯高于 DGA（95.6％vs57.5％， P<0.0

15、5）。與之相似，NF-κB在GCA中陽性表達(dá)率為75.0％，高于DGA組織中的表達(dá)（48.5％，P<0.05）。在伴有 Hp感染的 GCA中，TNF-α陽性表達(dá)率為95.6%（43/45），在DGA組為57.5%（23/40），兩者之間存在顯著差異（P<0.05）；同樣，Hp感染GCA組織中NF-κB蛋白表達(dá)明顯高于DGA組（75.0%vs48.5%，P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、不同部位胃癌患者Hp感染情況無明顯差

16、異，提示Hp感染是GCA和DGA發(fā)病的危險(xiǎn)因素。
　　2、Hp CagA+菌株在不同部位胃癌間無顯著差異，而GCA患者VacA+菌株及CagA+/VacA+感染率要高于DGA。表明Hp VacA+菌株為GCA發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素。
　　3、TNF-α和NF-κB在GCA腫瘤組織中的表達(dá)較高，Hp陽性GCA組織中TNF-α和NF-κB的表達(dá)同樣高于DGA，可能提示Hp感染在GCA發(fā)生中發(fā)揮重要作用。
　　4、不同部位胃癌中