靶向示蹤SPIO標(biāo)記的OECs移植治療大鼠脊髓損傷的研究.pdf

1、目的：1.從SD新生鼠嗅黏膜取材原代培養(yǎng)提純鑒定嗅鞘細(xì)胞。2.探討嗅鞘細(xì)胞在體外模擬的脊髓損傷缺氧內(nèi)環(huán)境中是否誘導(dǎo)自噬，并檢測(cè)自噬對(duì)嗅鞘細(xì)胞增殖能力的影響。3.驗(yàn)證嗅鞘細(xì)胞移植對(duì)大鼠半橫斷損傷的治療作用。4.探討SPIO體外標(biāo)記嗅鞘細(xì)胞的合適方案，以及體外成像特點(diǎn)。
　　方法：1.用酶消化法和改良的Nash差速貼壁法分離提純嗅鞘細(xì)胞，采用CCK-8法繪制生長(zhǎng)曲線，選出增殖較好的細(xì)胞代次；利用免疫熒光法鑒定細(xì)胞屬性和純度。2.采用氧

2、濃度為2％作為低氧條件（低氧處理組），培養(yǎng)SD新生鼠嗅黏膜來(lái)源的OECs，以正常條件下培養(yǎng)的OECs作為對(duì)照組，采用自噬抑制劑3-MA處理后的OECs繼續(xù)在低氧條件下培養(yǎng)作為3-MA低氧處理組，在相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)；對(duì)照組、4h低氧處理組、8h低氧處理組，Western blotting法檢測(cè)各組OECs中HIF-1α（Hypoxia inducible factor-1，低氧誘導(dǎo)因子-1α）、自噬標(biāo)志蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ和自噬標(biāo)志基

3、因Beclin-1的蛋白表達(dá)水平；對(duì)照組、自噬抑制劑3-MA處理的OECs然后在正常條件下培養(yǎng)作為3-MA處理組、低氧組、3-MA低氧處理組，采用CCK-8法檢測(cè)各組OECs的增殖能力。3.建立SD大鼠脊髓左側(cè)半橫斷損傷模型，實(shí)驗(yàn)組傷后立即注射嗅鞘細(xì)胞，對(duì)照組只注射完全培養(yǎng)基，單純損傷組不注射。于1、2、4、6、8周對(duì)各組實(shí)驗(yàn)鼠進(jìn)行大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能（BBB）評(píng)分。明確嗅鞘細(xì)胞移植對(duì)脊髓半橫斷損傷大鼠的治療效果。4.用多聚左旋賴(lài)氨酸包被過(guò)

4、的SPIO納米粒子標(biāo)記OECs，普魯士藍(lán)染色和透射電鏡下觀察標(biāo)記結(jié)果，對(duì)標(biāo)記后的嗅鞘細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞活性和增殖能力的檢測(cè)并實(shí)現(xiàn)體外MRI成像。
　　結(jié)果：1.經(jīng)原代分離、提純培養(yǎng)的SD新生鼠嗅黏膜來(lái)源嗅鞘細(xì)胞大多數(shù)呈梭形，典型的雙極、三極細(xì)胞形態(tài)。激光共聚焦顯微鏡下GFAP和P75雙染陽(yáng)性的為嗅鞘細(xì)胞。根據(jù)計(jì)算公式其純度可達(dá)87%。2.低氧誘導(dǎo)的自噬對(duì)大鼠嗅鞘細(xì)胞的增殖能力具有促進(jìn)作用。3.嗅鞘細(xì)胞移植對(duì)脊髓半橫斷損傷有治療作用。4.

5、成功應(yīng)用SPIO標(biāo)記嗅鞘細(xì)胞且不影響其生物學(xué)特性，MRI體外成像顯示1×106數(shù)量級(jí)細(xì)胞在軸位和矢狀位的T2WI和SWI序列上信號(hào)可較好顯示。
　　結(jié)論：1.成功原代培養(yǎng)、提純嗅鞘細(xì)胞。
　　2.低氧誘導(dǎo)的自噬對(duì)大鼠嗅鞘細(xì)胞的增殖能力具有促進(jìn)作用。
　　3.嗅鞘細(xì)胞移植對(duì)脊髓半橫斷損傷有治療作用。
　　4.成功應(yīng)用SPIO標(biāo)記嗅鞘細(xì)胞且不影響細(xì)胞基本生物學(xué)特性和增殖能力，并實(shí)現(xiàn)MRI體外成像，為以后嗅鞘細(xì)胞移植入