人乳頭瘤病毒整合狀態(tài)與宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　1.探討宮頸上皮內(nèi)瘤變（Cervical Intraepithelial Neoplasia，CIN）及宮頸癌（Cervical Ccancer，CC）組織中人乳頭瘤病毒（Human Papillomaviruses，HPV）的整合狀態(tài)和基因型分布。
　　2.探討宮頸癌組織中HPV16和HPV58的基因整合規(guī)律，整合位點分布及整合基因功能，分析其整合與宮頸癌臨床病理之間的聯(lián)系。
　　方法：
　　收集2

2、008年5月至2013年5月在青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院行宮頸冷刀錐切術(shù)和宮頸癌根治術(shù)并具有完整病例資料患者的病理組織蠟塊共149例，通過全基因組測序和高通量病毒整合檢測方法，檢測149例標(biāo)本中HPV整合型別及其整合位點信息。
　　結(jié)果：
　　1.149例宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌患者的平均年齡為42.30±7.49歲，93例檢測到HPV的整合，其平均年齡為41.34±6.84歲。＜45歲CIN及宮頸癌患者的HPV整合率高于≥45歲

3、患者。
　　2.149例組織樣本中，有93例發(fā)生了HPV的整合，其整合率為62.42％，HPV整合率隨其病變嚴(yán)重程度加重而升高（p＜0.01）。HPV在CIN3和宮頸癌中的整合率均明顯高于CIN1和CIN2（p均＜0.01）。在93例發(fā)生整合的病例中，HR-HPV整合率為83.87%，HR-HPV整合率隨病變嚴(yán)重程度增加而升高（p＜0.01）。
　　3.在149例宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌組織標(biāo)本中前五種常見的整合基因型（根據(jù)整

4、合率遞減）為：HPV16（42.28%）,58（20.13%），31（18.12%），35（16.11%）和33（8.05%）；在35例CIN1標(biāo)本中，依次為HPV58（11.43%），52（8.57%）和56/66/68（均為5.71%）；在35例CIN2標(biāo)本中，依次為HPV16/58(均為14.29%)，33/66(均為8.57%)和52（5.71%）；43例CIN3組織標(biāo)本中僅檢測出4種基因型整合，依次為HPV16（65.12%）

5、，58（16.28%），33（6.98%）和31（2.33%）；在36例宮頸癌組織標(biāo)本中，依次為HPV16（80.56%），31（69.44%），35（66.67%），58（38.89%）和51（22.22%）。
　　4.149例宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌組織標(biāo)本中，檢測到多種型別的HPV整合。宮頸癌多重整合率達(dá)100%，明顯高于CIN組織中多重整合率（p＜0.01）；在CIN組織中，HPV的多重整合率無明顯變化趨勢，與病變程度無相關(guān)

6、性（p＞0.05）。CIN的HPV單一整合率明顯高于宮頸癌組織（p＜0.01）；在CIN中，HPV的單一整合率均高于多重整合，且隨病變程度的加重而升高（p＜0.05）。
　　5. HPV16在所有宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中的整合率達(dá)42.28%，整合位點廣泛分布于1號到X染色體，其中1號，2號，4號，X和5號染色體上發(fā)生整合的樣本數(shù)最多。HPV58在所有CIN及CC中的整合率達(dá)20.13%，整合位點也廣泛分布于1號到X染色體，其中5

7、號，9號，2號，3和4號染色體上發(fā)生整合的樣本數(shù)最多。HPV病毒斷裂可發(fā)生在E6到LCR中的任何基因，最常見的部位是L1和E1基因。在29例檢測到HPV16整合組織中，有17例的整合發(fā)生在基因啟動子區(qū)域，在14例HPV58整合組織中，有1例檢測出啟動子區(qū)域的整合，在所有的94個整合位點所在的基因及其鄰近基因中，不乏與腫瘤發(fā)生及免疫功能相關(guān)的基因。
　　6. HPV16和HPV58的整合均與宮頸癌的臨床分期有關(guān)（p均＜0.05）。當(dāng)

8、病理類型為鱗癌，宮頸間質(zhì)浸潤深度≥1/2和淋巴血管間隙受累時，HPV16的整合率升高；當(dāng)年齡≥50歲，組織學(xué)分化為中-低分化，宮頸間質(zhì)浸潤深度≥1/2，淋巴血管間隙受累和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時，HPV58的整合率升高，雖然兩種病毒的整合率在這些病理因素中均無統(tǒng)計學(xué)意義，但仍提示病毒整合是以上臨床病理因素可能的危險因素，而病毒多次整合是宮頸間質(zhì)浸潤深度≥1/2和淋巴血管間隙受累可能的的高危因素。
　　結(jié)論：
　　1. HPV DNA整合

9、更易發(fā)生于45歲以下的女性，故對于45歲以下宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌患者應(yīng)加強隨訪管理。
　　2. HPV和HR-HPV整合在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌中均有發(fā)生，其整合率隨其病變嚴(yán)重程度的加重而升高，提示HPV整合在宮頸癌發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。宮頸癌組織中多重整合率升高，而CIN組織中的單一整合率又與病變嚴(yán)重程度相平行，提示在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌的不同發(fā)展階段，HPV單一或多重的整合特點不盡相同，說明HPV整合在病變的發(fā)生發(fā)

10、展過程中發(fā)揮不同的作用。
　　3.青島地區(qū)宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中常見的HPV整合型別為：HPV16，58，31，35和33；隨著疾病嚴(yán)重程度的加重，HPV不同型別的整合檢出率發(fā)生變化。
　　4. HPV16和HPV58基因可廣泛整合至宿主各染色體，分布無規(guī)律性。HPV病毒斷裂可發(fā)生在E6到LCR中的任何區(qū)域。L1基因是HPV16和HPV58最常見的斷裂部位，其次為E1基因。HPV16和HPV58整合位點均容易出現(xiàn)在腫瘤發(fā)生