蛋白酶Nexin-1在結腸癌中對Sonic Hedgehog表達的影響.pdf

1、目的：
　　明確蛋白酶Nexin-1（PN-1）在結腸癌中的表達情況及其與Sonic Hedgehog（SHH）的關系。
　　方法：
　　用慢病毒包裝BRAF-V600E質粒和空載體（vector）質粒并感染結腸黏膜上皮細胞 NCM460，經(jīng)嘌呤霉素篩選出穩(wěn)定表達BRAF突變和空載體的細胞（分別記為NCM460-BRAFV600E細胞和NCM460-vector細胞）,然后采用western blot檢測BRAF-V6

2、00E蛋白及其下游的p-MEK蛋白表達情況以確認轉錄成功，之后采用熒光定量PCR檢測PN-1、SHH和GLI1在兩組細胞中的相對表達量。采用熒光定量PCR檢測PN-1和SHH在五組結腸癌細胞系（RKO，HT29，HCT116，SW480，LOVO）中的相對表達量；選擇PN-1表達最高和最低的細胞系分別沉默和過表達PN-1，并檢測SHH的表達水平變化。在人結腸癌組織及癌旁組織中采用免疫組織化學方法檢測PN-1、SHH的表達情況并分析。

3、r>　　結果：
　　NCM460-BRAFV600E細胞比NCM460-vector細胞和空白對照組NCM460細胞 BRAF、p-MEK表達明顯升高，表明轉染成功。NCM460-BRAFV600E細胞比NCM460-vector細胞中PN-1表達明顯升高（P＜0.05），而SHH及GLI1則明顯表達降低（P＜0.05）。五組結腸癌細胞系中PN-1和SHH均有不同程度的表達，PN-1表達最高的是 LOVO，最低的是 RKO；SHH