橙皮苷對斑馬魚酒精性脂肪肝的治療作用及其機制研究.pdf

1、酒精性脂肪肝（alcoholic fatty liver disease，AFLD）以長期大量飲酒而導致脂肪在肝細胞中過度貯積為主要特征，是酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)的早期階段，及時治療可以得到有效控制甚至逆轉(zhuǎn)，對ALD的防治意義重大。
　　中醫(yī)藥治療AFLD歷史悠久且療效顯著，深入研究中藥及其成分對AFLD的作用效果及機制，對AFLD的防治意義重大。橙皮苷是中藥陳皮、枳實的主要成分，具有

2、抗炎、抗氧化、降膽固醇等多種活性作用，對AFLD有一定的療效，而具體的作用機制尚不明確。
　　斑馬魚因其獨特的生物學優(yōu)勢，現(xiàn)已廣泛應用于疾病模型的建立和藥物篩選，其中斑馬魚急性酒精性脂肪肝模型的建立，為進一步研究AFLD的發(fā)病機制及開展藥物研究開辟了新的途徑。
　　基于以上背景，本研究利用斑馬魚急性酒精性脂肪肝模型，旨在進一步研究橙皮苷對AFLD的保護作用及其機制，為中藥在AFLD上的應用提供依據(jù)。
　　實驗動物選擇A

3、B野生型斑馬魚、肝臟熒光轉(zhuǎn)基因斑馬魚Tg(lfabp10α：eGFP)。
　　隨機挑選4dpf(days post fertilization)的斑馬魚于培養(yǎng)皿中，對照組只加培養(yǎng)用水，模型組中加入含350mM乙醇的培養(yǎng)用水，培育32小時，建立急性酒精性脂肪肝模型，收集一部分樣品進行后續(xù)研究。隨后，隨機將模型組分為5組：0.1％DMSO組、模型組、3個濃度橙皮苷處理組(25ug/mL、12.5ug/mL、6.25ug/mL)，與對照

4、組一起置于28.5℃恒溫箱培養(yǎng)中培養(yǎng)48小時，收集各組幼魚進行下一步研究。
　　通過油紅O染色、尼羅紅染色、HE染色技術(shù)觀察斑馬魚肝臟形態(tài)學變化、脂滴沉積情況及組織病理學改變;運用qPCR技術(shù)來檢測目標基因的mRNA表達。采用spss20軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差（(x)±s）表示，P＜0.05視為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果表明：
　　1.相比對照組，置于含350mM乙醇的水中培育32小時的斑馬魚肝組織

5、形態(tài)改變和脂肪變程度更明顯，證實成功建立斑馬魚急性酒精性脂肪肝模型。
　　2.油紅O染色、尼羅紅染色顯示橙皮苷可顯著減輕酒精導致的肝內(nèi)脂滴沉積和肝臟形態(tài)學改變，斑馬魚石蠟切片的HE染色證實橙皮苷能改善酒精導致的肝臟病理變化。說明橙皮苷能改善酒精所致的斑馬魚肝臟脂肪變。
　　3.橙皮苷通過調(diào)節(jié)酒精代謝、脂質(zhì)代謝以及抵抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激和DNA損傷來抵御酒精對肝臟的損害，具體表現(xiàn)為下調(diào)cyp2y3，cyp3a65，fads2，fasn