腫瘤抑制基因PDCD4在子宮內(nèi)膜樣癌中的表達(dá)及臨床病理學(xué)意義.pdf

1、目的：
　　子宮內(nèi)膜癌(Endometrial cancer，EC)為女性常見(jiàn)惡性腫瘤，它的發(fā)病率位居乳腺癌、結(jié)直腸癌和肺癌之后。子宮內(nèi)膜癌根據(jù)病因、臨床表現(xiàn)、病理特點(diǎn)劃為Ⅰ型及Ⅱ型。Ⅰ型是雌激素依賴型，即子宮內(nèi)膜樣癌(endometrioid endometrial carcinomas，EEC)，而Ⅱ型是非子宮內(nèi)膜樣癌(non-endometrioid endometrial carcinomas，NEEC)。子宮內(nèi)膜樣癌占子

2、宮內(nèi)膜癌新發(fā)病例的70％-80％，與雌激素刺激有關(guān)。子宮內(nèi)膜癌因?yàn)榫哂性缙诘呐R床癥狀，如不規(guī)則的陰道流血和陰道分泌物異常而易被早期診斷。對(duì)于早期的病例，手術(shù)是治療的最佳選擇，5年生存率約為96％。然而，一些晚期病例伴有腹部或盆腔疼痛、腹部膨隆、早飽、腸道或膀胱功能的改變，致使生存率急劇下降。盡管這些患者在疾病進(jìn)展期階段，使用了傳統(tǒng)的化療、放療和激素治療，但仍有很多患者對(duì)當(dāng)前這些治療不敏感。因此，新的腫瘤標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)對(duì)子宮內(nèi)膜癌的初期確診

3、與后期治療有重要意義。
　　Programmed cell death4(PDCD4)最早作為一個(gè)細(xì)胞凋亡啟動(dòng)后表達(dá)上調(diào)的基因而被發(fā)現(xiàn)。后來(lái)，它被確定為一種新的腫瘤抑制基因，在阻止腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，以及轉(zhuǎn)錄與翻譯中有著重要的作用。一些研究已指出，PDCD4通過(guò)調(diào)節(jié)某些轉(zhuǎn)錄因子的活性來(lái)改變特定基因的轉(zhuǎn)錄，例如c-Jun、Sp1和p53基因。PDCD4抑制蛋白翻譯通過(guò)以下兩種不同的方式:第一種是eIF4A依賴機(jī)制，即PDCD4與真核翻

4、譯起始因子eIF4A聯(lián)合，抑制eIF4A RNA解旋酶活性;第二種是eIF4A非依賴性機(jī)制，即PDCD4通過(guò)RNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域與多聚(A)結(jié)合蛋白(PABP)相互作用，從而調(diào)節(jié)蛋白的翻譯。PDCD4在正常組織中廣泛表達(dá)，包括肝、腎和大腦，但在多種人類腫瘤中表達(dá)下調(diào)或缺失，如肺癌、大腸癌、乳腺癌和卵巢癌。但是，PDCD4在EEC（子宮內(nèi)膜樣癌）患者中是如何表達(dá)的以及它在臨床應(yīng)用中的價(jià)值仍不清楚。
　　本研究的目的是檢測(cè)EEC組織與對(duì)照

5、子宮內(nèi)膜組織以及人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系KLE（低分化）（簡(jiǎn)稱:人EC細(xì)胞系KLE）與對(duì)照子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞中的PDCD4水平變化情況，并分析PDCD4水平變化情況與子宮內(nèi)膜癌患者臨床及病理特征的關(guān)聯(lián)性，初步探索PDCD4在EEC發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中所起到的影響。
　　方法：
　　一、采用Real-time fluorescence quantitative PCR(qRT-PCR)技術(shù)測(cè)定EEC與對(duì)照子宮內(nèi)膜中的PDCD4mRNA的

6、表達(dá)情況。
　　二、采用Western blot技術(shù)測(cè)定EEC與對(duì)照子宮內(nèi)膜中PDCD4蛋白的表達(dá)情況。
　　三、采用IHC測(cè)定EEC與對(duì)照子宮內(nèi)膜中的PDCD4蛋白表達(dá)水平及細(xì)胞定位。
　　四、采用ICC測(cè)定人EC細(xì)胞系KLE與對(duì)照子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞中的PDCD4表達(dá)水平。
　　五、使用GraphPad Prism5軟件分析。p＜0.05被認(rèn)為在統(tǒng)計(jì)學(xué)上存在差別。
　　結(jié)果：
　　一、Real-ti

7、me fluorescence quantitative PCR(qRT-PCR)方法測(cè)定EEC與對(duì)照子宮內(nèi)膜中PDCD4mRNA的含量情況。
　　檢測(cè)15份新鮮冰凍的EEC與18份對(duì)照子宮內(nèi)膜中PDCD4mRNA的含量情況。結(jié)果顯示，EEC與對(duì)照子宮內(nèi)膜之間的PDCD4mRNA的含量相似，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.88)。
　　二、Western blot技術(shù)測(cè)定EEC與對(duì)照子宮內(nèi)膜里PDCD4蛋白的含量情況。
　　檢

8、測(cè)15份新鮮冰凍的EEC與18份對(duì)照子宮內(nèi)膜中PDCD4蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，EEC與對(duì)照子宮內(nèi)膜之間的PDCD4蛋白的含量相似，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.10)。
　　三、IHC測(cè)定EEC與對(duì)照子宮內(nèi)膜組織中PDCD4蛋白含量情況及細(xì)胞定位。
　　1、檢測(cè)52份EEC與70份對(duì)照子宮內(nèi)膜（36份增生期、34份分泌期）石蠟切片標(biāo)本。結(jié)果顯示:在對(duì)照子宮內(nèi)膜及EEC標(biāo)本里，PDCD4的表達(dá)主要定位于對(duì)照組子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞與

9、EEC的胞漿。
　　2、經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，增生期對(duì)照子宮內(nèi)膜中PDCD4的表達(dá)明顯高于分泌期的對(duì)照子宮內(nèi)膜(p＜0.001)。
　　3、PDCD4在中分化或低分化EEC組織中的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照子宮內(nèi)膜（增生期，proliferative phase）(p＜0.001)，PDCD4在高分化EEC標(biāo)本中的表達(dá)程度明顯高于對(duì)照組子宮內(nèi)膜（分泌期，secretory phase）(p＜0.001);然而，PDCD4的含量在高分化的E

10、EC標(biāo)本中與對(duì)照組子宮內(nèi)膜標(biāo)本（增生期）之間，以及中分化或低分化EEC組織中與對(duì)照組子宮內(nèi)膜組織（分泌期）之間沒(méi)有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　四、采用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(ICC)測(cè)定人EC細(xì)胞系KLE與對(duì)照子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞中PDCD4的表達(dá)情況。
　　1、在對(duì)照組腺上皮細(xì)胞和人EC細(xì)胞系KLE中，PDCD4染色主要定位于胞漿。
　　2、PDCD4在人EC細(xì)胞系KLE中表達(dá)水平低，與在對(duì)照子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞中的表達(dá)水平相似。

11、
　　五、EEC組織PDCD4蛋白表達(dá)與患者臨床病理分期的關(guān)聯(lián)性
　　PDCD4蛋白的表達(dá)與患者年齡、浸潤(rùn)肌層深度、FIGO分期、ER和PR的高低程度沒(méi)有關(guān)聯(lián)性。然而，PDCD4蛋白的表達(dá)與EEC的分化程度卻呈現(xiàn)顯著關(guān)聯(lián)性。PDCD4在高分化EEC中的表達(dá)水平高于中分化或低分化EEC水平(p＜0.01)，這提示PDCD4的低表達(dá)大概與EEC患者疾病的不良進(jìn)展程度相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　一、PDCD4陽(yáng)性染色多數(shù)定

12、位在子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞的胞漿中，并且PDCD4在對(duì)照組增生期子宮內(nèi)膜中的表達(dá)明顯高于分泌期。
　　二、中分化或低分化EEC中PDCD4的表達(dá)比對(duì)照組增生期子宮內(nèi)膜組織明顯降低。
　　三、PDCD4表達(dá)與腫瘤的分化程度明顯相關(guān)，在EEC高分化組里PDCD4的表達(dá)明顯高于中分化或低分化組，這表明PDCD4在EEC的分化過(guò)程中有重要作用，提示PDCD4可用來(lái)評(píng)估EEC患者腫瘤惡性程度的一個(gè)潛在的有價(jià)值的指標(biāo)。
　　創(chuàng)新性及意

13、義:
　　一、發(fā)現(xiàn)和對(duì)照組增生期子宮內(nèi)膜組織相比，PDCD4在中分化或低分化EEC組織里陽(yáng)性率明顯下降，而且其表達(dá)水平與腫瘤的分化程度顯著相關(guān)，這為研究PDCD4在EEC中的作用和具體機(jī)制奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)為EEC的治療提供了一個(gè)可能的方向。
　　二、還發(fā)現(xiàn)PDCD4在子宮內(nèi)膜分泌期與增生期的陽(yáng)性指數(shù)明顯不同，這提示PDCD4在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)受卵巢激素的調(diào)節(jié)。
　　本研究的局限性
　　本研究所收集的新鮮EEC組織