外源性硫化氫對(duì)肺纖維化大鼠肺組織中MMP-9、TIMP-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：應(yīng)用博來霉素（bleomycin,BLM）誘導(dǎo)大鼠構(gòu)建肺纖維化模型，探討基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1, TIMP-1）在肺纖維化過程中的表達(dá)及應(yīng)用外源性硫化氫的干預(yù)作用。
　　方法：健康雄性SD大鼠共45只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組（每組15只），即對(duì)照組、BLM組

2、、BLM+NaHS（硫化氫供體）組。BLM組、BLM+NaHS組按5mg/kg劑量給予BLM溶液一次性氣管內(nèi)注入建立肺纖維化模型，對(duì)照組氣管內(nèi)注入等體積的生理鹽水，造模后第一天開始，BLM+NaHS組每天腹腔注射NaHS溶液（28μmol/kg)；BLM組和對(duì)照組每天腹腔注射等體積生理鹽水。造模后分別在第7,14,28天進(jìn)行取材，各組每次隨機(jī)處死5只大鼠。取左肺組織放于4％甲醛固定后做HE染色和Masson染色電鏡觀察肺泡炎和肺纖維化改

3、變，免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)肺組織中 MMP-9、TIMP-1蛋白的表達(dá)情況；取右肺組織進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)肺組織中MMP-9、TIMP-1 mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.HE和Masson染色結(jié)果顯示：對(duì)照組各時(shí)間段均未見炎癥及肺纖維化改變，BLM組7d以炎癥反應(yīng)為主，14d開始出現(xiàn)纖維區(qū),肺泡腔開始出現(xiàn)較多肺成纖維細(xì)胞；28d肺泡炎癥明顯減輕，肺泡腔內(nèi)可見大量肌成纖維細(xì)胞及膠原沉積，肺纖維化模型形成；BLM+NaHS組也出

4、現(xiàn)了肺泡炎和纖維化改變，但較BLM組有明顯減輕。
　　2.免疫組化和RT-PCR結(jié)果顯示：對(duì)照組各時(shí)期MMP-9、TIMP-1僅有少量表達(dá)，而BLM組和BLM+NaHS組MMP-9、TIMP-1表達(dá)與對(duì)照組比較有顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05），BLM+NaHS處理組MMP-9的表達(dá)在各時(shí)間階段較BLM組有不同程度減低，7d時(shí)MMP-9表達(dá)降低與BLM組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.01），14、28d較BLM組比較

5、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05），BLM+NaHS組TIMP-1的表達(dá)在各時(shí)間階段較BLM組有不同程度的降低，7d時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05），14、28d時(shí)差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.01）。
　　3.MMP-9/TIMP-1平衡比值結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較， BLM組MMP-9/TIMP-1平衡比值在7d時(shí)較對(duì)照組升高，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.01），在14、28d時(shí)比值較對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05

6、）；BLM+NaHS組MMP-9/TIMP-1比值在7d時(shí)較BLM組下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05），14、28d較BLM組有升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）；較對(duì)照組比較，BLM+NaHS組MMP-9/TIMP-1比值在7d時(shí)有升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05），14、28d時(shí)比值有降低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：1.外源性硫化氫能夠減輕博來霉素所致大鼠肺泡炎和肺纖維化的程度，具有抗肺纖維化作用。