十味調(diào)脂方對非酒精性脂肪性肝病大鼠MMP-2mRNA、TIMP-2mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本實驗應(yīng)用高脂飼料誘導(dǎo)大鼠非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）模型，隨機(jī)分組后分別予中藥“十味調(diào)脂方”進(jìn)行實驗，西藥辛伐他汀做對照。治療后取標(biāo)本觀察肝臟組織學(xué)變化；測定血清中甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平的變化；測定肝組織TG、TC的含量；運用RT-PCR技術(shù)檢測大鼠肝組織基質(zhì)金屬蛋白酶-2 mRNA（MMP-2mRNA）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-2mRNA（TIMP-

2、2 mRNA）的表達(dá)情況，從而探討十味調(diào)脂方對NAFLD大鼠體內(nèi)TG、TC的影響及對MMP-2mRNA與TIMP-2mRNA表達(dá)的影響，探討十味調(diào)脂方對N AFLD大鼠的作用效果及可能機(jī)制，以期為中醫(yī)藥防治NAFLD提供實驗依據(jù)。
　　方法：健康、清潔級Wistar雄性大鼠40只，體重250-280g，予普食適應(yīng)性喂養(yǎng)7天，觀察大鼠一般情況，體質(zhì)健康者用于實驗。將40只大鼠隨機(jī)分為4組，正常組（N）、模型組（M）、十味調(diào)脂組（Z）

3、、辛伐他汀組（X），每組各10只。其中除正常組予普通飼料外，其余3組均予高脂飼料，8周后，分別從各高脂飼料喂養(yǎng)組的大鼠中隨機(jī)選取1只大鼠處死，取其肝組織進(jìn)行病理學(xué)檢查，以檢測高脂飼料誘導(dǎo)的NAFLD模型是否成功。確定造模成功后第二天開始予各治療組灌胃給藥，正常組與模型組予生理鹽水灌胃作對照。治療4周后處死各組大鼠，留取肝臟組織和血清標(biāo)本。用HE染色觀察大鼠肝臟組織的病理形態(tài)變化；采用2,4-二硝基苯肼法（比色法）測定血清TG、TC、AL

4、T、AST的含量，應(yīng)用色譜-可見分光光度法檢測肝組織中TG和TC的含量。運用RT-PCR技術(shù)檢測大鼠肝臟中MMP-2、TIMP-2mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠肝臟病理學(xué)結(jié)果：正常組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，中央靜脈周圍肝細(xì)胞呈輻射形式排列，形態(tài)一致整齊，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，大小均勻，細(xì)胞核正常，位于中央，胞質(zhì)豐富；未見明顯炎癥細(xì)胞浸潤及脂肪變性、壞死。
　　模型組大鼠肝小葉病變嚴(yán)重，偶可見炎性細(xì)胞浸潤，肝小葉形

5、態(tài)受損，構(gòu)造不清楚，細(xì)胞索排列無規(guī)律，肝細(xì)胞水腫，胞漿內(nèi)脂肪空泡擠壓核圓，肝組織呈彌漫性脂肪變。余各治療組大鼠肝細(xì)胞脂肪性變均有不同程度好轉(zhuǎn)的趨勢。
　　2.各組大鼠血清和肝組織各指標(biāo)含量比較:與正常組相比較，模型組大鼠血清TG、TC、ALT、AST和肝組織TG、TC含量顯著升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；與模型組相比較，西藥組和中藥組大鼠血清TG、TC、ALT、AST及肝組織TG、TC含量明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；與中藥組相比，西

6、藥組大鼠血清TG、TC含量顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；相比于西藥組大鼠中藥組大鼠肝組織中TG、TC含量顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；兩組血清ALT、AST差異無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　3.各組大鼠肝臟MMP-2mRNA、TIMP-2mRNA表達(dá)水平:各組大鼠MMP-2mRNA表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異。與正常組相比模型組TIMP-2mRNA呈高表達(dá)狀態(tài)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；MMP-2/TIMP-2比值降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；模型組與中藥組相比TIMP

7、-2mRNA表達(dá)降低，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；中藥組MMP-2/TIMP-2比值較模型組比值顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。與模型組比較，西藥組大鼠TIMP-2mRNA表達(dá)明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；而MMP-2/TIMP-2比值差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與中藥組相比較，西藥組TIMP-2mRNA水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；MMP-2/TIMP-2比值中藥組較西藥組顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.NAFLD模型大鼠血清中T

8、G、TC、ALT、AST以及肝組織中TG、TC含量較正常組明顯升高，可能是引起大鼠肝細(xì)胞脂肪性改變、炎性細(xì)胞浸潤、肝細(xì)胞纖維化改變等病理變化的重要因素。
　　2.NAFLD模型大鼠肝臟中MMP-2/TIMP-2比值的變化，是脂質(zhì)沉積肝細(xì)胞引起肝細(xì)胞炎性改變、纖維化等嚴(yán)重并發(fā)癥的重要發(fā)病機(jī)制之一。
　　3.十味調(diào)脂方可能是通過降低NAFLD模型大鼠體內(nèi)血脂的含量，上調(diào)MMP-2/TIMP-2比值，從而緩解肝臟脂質(zhì)變性加速膠原的