蒙藥肉蔻五味緩釋微丸的設計及評價.pdf

1、肉蔻五味丸為蒙醫(yī)經典驗方，由肉豆蔻、土木香、木香、廣棗、蓽茇五味藥材配伍組成，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》（蒙藥分冊），用于祛心“赫依”病，心煩失眠，心神不安?，F(xiàn)代藥理學研究表明肉蔻五味丸對抑郁癥亦有效。藥效物質篩選結果表明肉豆蔻揮發(fā)油、土木香倍半萜成分、木香倍半萜成分、廣棗酚酸類成分和蓽茇生物堿類為主要活性物質。現(xiàn)有的藥動學研究資料表明，除酚酸類成分外，其余幾種成分由于水溶性差，導致口服給藥后吸收差，治療效果不太理想。

2、>　　為適應中藥制劑現(xiàn)代化的需要，本研究在中醫(yī)藥理論的指導下，對肉蔻五味丸進行二次開發(fā)，從提取分離工藝、有效部位精制純化、藥物制劑新技術、質量評價標準和藥物動力學等方面進行研究，開發(fā)出滿足臨床需求的肉蔻五味緩釋微丸。
　　第一部分：肉蔻五味丸中藥材有效部位提取及純化工藝研究
　　目的：采用超聲輔助提取技術優(yōu)化藥材有效成分提取工藝，采用硅膠柱色譜對土木香和木香倍半萜成分進行分離純化，大孔樹脂吸附技術純化廣棗沒食子酸和蓽茇胡椒堿

3、。
　　方法：分別以土木香內酯和異土木香內酯提取率、木香烴內酯和去氫木香內酯提取率、沒食子酸提取率和胡椒堿提取率為土木香、木香、廣棗和蓽茇指標，通過考察提取溶劑、超聲提取時間及料液比，確定各藥材的最佳提取工藝。在此基礎上，通過考察硅膠柱粒度、上樣量、洗脫流速及洗脫液組分，優(yōu)選土木香倍半萜組分、木香倍半萜組分的純化工藝；通過靜態(tài)吸附/解吸試驗篩選合適的大孔樹脂、動態(tài)吸附試驗考察影響洗脫的因素，綜合優(yōu)選廣棗沒食子酸、蓽茇胡椒堿的大孔樹

4、脂純化工藝。
　　結果：土木香的優(yōu)化提取工藝為：甲醇作為提取溶劑，料液比1:20（g/mL），超聲輔助提取40 min；純化工藝為：100-200目硅膠裝柱，上樣量1:40，石油醚-丙酮（30:1）為洗脫溶劑，2.0 BV/h流速洗脫，1 kg土木香經過提取、分離純化后最終得到固體32.68 g，經過含量測定，其中含有異土木香內酯14.64 g（44.80％），土木香內酯9.29 g（29.50%）。木香的優(yōu)化提取工藝為：無水乙醇

5、為提取溶劑，料液比1:30（g/mL），超聲輔助提取20 min；純化工藝為：100-200目硅膠裝柱，上樣量1:30，石油醚-乙酸乙酯（25:1）為洗脫溶劑，2.0 BV/h流速洗脫，1 kg木香經過提取、分離純化后最終得到固體37.14 g，經過含量測定，其中含有木香烴內酯10.52 g（28.33%），去氫木香內酯12.16 g（32.74%）。廣棗的優(yōu)化提取工藝為：80%乙醇為提取溶劑，料液比1:30（g/mL），超聲輔助提取3

6、0 min；純化工藝為：采用NKA-9大孔樹脂純化沒食子酸，上柱濃度為2.94 mg/mL，流速2 BV/h，80%乙醇進行洗脫。3 kg廣棗，經提取、濃縮、大孔樹脂分離純化后，得到固體4.62 g，UPLC測定，其中含沒食子酸3.39 g（73.46%）。蓽茇的優(yōu)化提取工藝為無水乙醇為提取溶劑，料液比1:30（g/mL），超聲輔助提取20 min；采用HPD100大孔樹脂純化胡椒堿，上柱液胡椒堿質量濃度為2.4 mg/mL，流速2 m

7、L/min，pH3的95%乙醇進行洗脫。0.5 kg蓽茇經提取、濃縮、大孔樹脂分離純化后，得到固體12.86 g， UPLC測定，其中含胡椒堿9.70 g（75.43%）。
　　結論：本方法制備的土木香、木香、廣棗、蓽茇提取物中的有效部位含量均大于50%，符合有效部位要求。
　　第二部分：中間體的精制及藥效學實驗
　　目的：提高提取物的穩(wěn)定性及溶解性，觀察中間體對慢性抑郁模型大鼠行為學的影響。
　　方法：將肉豆蔻

8、揮發(fā)油制備成環(huán)糊精（?-CD）包合物，提高其穩(wěn)定性，以包合率為指標，正交試驗法優(yōu)化包合工藝，差示掃描量熱法（differential scanning calorimetry, DSC）和紅外光譜法對包合物進行表征。分別以泊洛沙姆188（Poloxamer188，P188）、PEG6000、聚乙烯吡咯烷酮 K30為載體材料，制備固體分散體，以溶出度為指標，考察載體材料、藥物/載體比例對難溶性藥物溶出度的影響，制備的固體分散體用DSC進行

9、表征。孤養(yǎng)方式結合慢性不可預見性刺激建立大鼠抑郁（CUMS）模型，觀察肉蔻五味中間體對抑郁大鼠行為學的影響。
　　結果：影響包合率的因素順序為包合時間>揮發(fā)油/?-CD比例>包合溫度，最優(yōu)工藝為包合時間為2 h，揮發(fā)油/??-CD比例1:10，包合溫度為50℃，此工藝下包合物的包合率為86.7%?？疾炷鞠闾崛∥?、土木香提取物、蓽茇提取物固體分散體中藥物的溶出度發(fā)現(xiàn)，以P188為載體制備的固體分散體為最佳，優(yōu)化得到的藥物/P188比

10、例分別為1:8、1:6和1:6。DSC結果顯示，固體分散體中，藥物的吸熱峰消失，只顯示P188的吸熱峰，說明固體分散體制備成功。肉蔻五味組(200、100、50 mg/kg)可以改善CUMS大鼠強迫游泳試驗的不動時間和新奇抑制攝食的潛伏期，具有抗焦慮、抗抑郁作用。
　　結論：藥效學實驗證實，肉蔻五味中間體對CUMS結合孤養(yǎng)大鼠模型有效，說明提取、純化及中間體制備工藝合理可行。
　　第三部分：肉蔻五味緩釋微丸制備工藝研究

11、>　　目的：采用擠出滾圓法制備丸芯，鍋包衣法制備肉蔻五味緩釋微丸，建立肉蔻五味緩釋微丸的質量控制方法。
　　方法：以圓整度和收率為指標，考察賦形劑、粘合劑和載藥量對丸芯成型的影響。在此基礎上，以擠出速度、滾圓速度和滾圓時間為影響因素設計正交試驗，對丸芯制備工藝進行優(yōu)化。以Eudragit RS100為包衣材料，考察包衣鍋轉速、噴槍壓力、噴液流速、包衣溫度及包衣增重等因素的影響作用，制備肉蔻五味緩釋微丸。為進一步完善藥物的質量控制方

12、法，建立了同時測定沒食子酸、胡椒堿、木香烴內酯、去氫木香內酯、異土木香內酯和土木香內酯的UPLC方法，建立了藥物溶出度試驗方法，對溶出曲線進行擬合比較，闡明藥物釋放機理。
　　結果：單因素實驗結果得藥物/微晶纖維素=3:7，采用0.5%羥丙甲纖維素為粘合劑制備丸芯。正交試驗表明滾圓轉速對丸芯成型影響最大，然后分別為滾圓時間和擠出速度。最終確定的藥物處方為：肉豆蔻揮發(fā)油?-環(huán)糊精包合物40 g，土木香倍半萜成分固體分散體18.3 g

13、，木香倍半萜成分固體分散體26.7 g，廣棗提取物0.058 g，蓽茇提取物固體分散體1.8 g，賦形劑MCC202.6 g。制備工藝為：藥物及輔料粉碎過80目篩，混勻，以0.5%HPMC水溶液為粘合劑制軟材，擠出機擠出速度40 rpm，篩網孔徑1 mm，滾圓速度800 rpm，滾圓時間3.5 min，出料，40℃干燥。包衣工藝條件為，進風口溫度35℃，包衣鍋轉速40 rpm，噴液流速4 mL/min，包衣增重4%。建立的UPLC條件為

14、：Waters BEH C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.7μm）；流動相為乙腈（A）-水（B），梯度洗脫程序0~0.8 min（8:92），0.8~1.0 min（8:92~52:48），1.0~6.5 min（52:48），6.5~7.0 min（52:48~8:92），進樣完成后中間平衡1 min，沒食子酸檢測波長270 nm，胡椒堿檢測波長343 nm，木香烴內酯、去氫木香內酯、土木香內酯、異土木香內酯檢測波長225

15、nm，體積流量0.3 mL/min；進樣體積4μL；柱溫為室溫。所測的6種成分在濃度區(qū)間內線性關系良好，方法學考察符合規(guī)定。溶出度試驗結果表明藥物釋放符合 Fick擴散定律，肉蔻五味緩釋微丸屬于膜控型緩釋微丸。
　　結論：按此工藝制備的肉蔻五味緩釋微丸各指標成分12 h釋放度均大于85%，釋放符合Fick擴散定律。建立的UPLC方法簡便快捷，靈敏度高，可用于肉蔻五味緩釋微丸、肉蔻五味丸中指標性成分的含量測定，為肉蔻五味丸的質量評價

16、提供了理論依據(jù)。
　　第四部分：肉蔻五味緩釋微丸在Beagle犬體內的藥物動力學研究
　　目的：建立同時測定 Beagle犬血漿中木香烴內酯、去氫木香內酯、異土木香內酯和土木香內酯的UPLC方法，初步研究肉蔻五味緩釋微丸的Beagle犬藥動學。
　　方法：Beagle犬隨機分組后，分別給予肉蔻五味緩釋微丸和肉蔻五味丸，采用雙周期交叉實驗，給藥后在規(guī)定時間取血，處理后進樣測定，采用非房室模型法計算藥物動力學參數(shù)。